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文献和实验一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理,学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖
,葡萄糖标准曲线的绘制:称取无水葡萄糖1.00g,溶于100 mL容量瓶中,制成浓度为10 mg/mL葡萄糖溶液,再从中依次吸收1,2,3,4,5,6 ml各溶于100 mL容量瓶中,制成浓度为0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6 mg/mL溶液,吸取1.0 mL葡萄糖溶液加入3 mL DNS,煮沸5 min,冷却5 min于560 nm处比色,绘制标准曲线。比活性:用考马斯亮蓝法确定酶液的蛋白浓度,使用牛血清白蛋白做标样。其他的与全活性相同。
计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测法计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测法
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