北京HIF-1α凝胶迁移突变探针(10μM)厂家

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名称：北京HIF-1α凝胶迁移突变探针(10μM)厂家
规格：30μl
编号：YT227
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：HIF-1α Mutation Probe For EMSA(10μM)
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的HIF-1α consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－HIF-1α的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行90-180个突变探针的冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

HIF-1 α consensus oligo的序列如下：
5"-TCT GTA CGT GAC CAC ACT CAC CTC-3"
3"-AGA CAT GCA CTG GTG TGA GTG GAG-5"

EMSA突变探针－HIF-1α中HIF-1α的公认的结合位点发生了突变，从而使HIF-1α无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和HIF-1α的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应中，正常的标记探针和HIF-1α的结合的条带不会被抑制。参考下图。


一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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·C端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)
编号：YT466
英文名称：C-EGFP plasmid（with CMV promoter）
规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含EGFP(Enhanced GreenFluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒的主要信息如下：

 

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Multiple cloning site	651-740
EGFP	741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site	1510-1531
SV40 polyAsignal	1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication	2064-2370
bla promoter	2395-2519
SV40 promoter	2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3704-4162
pUC origin	4291-4958

本质粒(5010bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。


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