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- LMAI Bio
- 美国/中国
- B050Hu01
- 2025年12月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 英文名：
Recombinant Estrogen Receptor Alpha (ERa)
- 库存：
20
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验新生代 Cenozoic era， Cainozoic era
新生代 Cenozoic era， Cainozoic era 由 John Phillips命名（ 1841）的地质年代最后的大代。哺乳类动物处于极盛，所以也称为哺乳类时代。分为第三纪和第四纪。第三纪从前到后又分为古新、始新、渐新、中新、上新等五世。第四纪分为更新世（最新世）和全新世（现世）。本代的年数推算距今为 6， 500万年到 6， 700万年前。人类的发展在第四纪，年数估算为 200万年，在高纬度地方广泛地覆盖着冰川。
前寒武时代 Precambrian era，PreCambrian era
最古的地质年代。从约45亿年前地球诞生开始约经历 40亿年。以前曾把这个时代分为太古代和元古代，但由于近年随着质量分析仪器的改进，使用同位素方法测定年代的进展，认为这样分为两代没有意义，而改变了前寒武时代的继续期间的见解。这个时代的地层是由花岗岩、变质岩，沉积岩、火山岩构成，多经过激烈的变性。由巴尔特悔地区、西伯利亚中部、加拿大、中国、朝鲜、蒙古、澳大利亚、南非、印度等构成了所谓盾状地的稳定的大陆。化石是完全缺乏的，但从澳大利亚约 6亿年前的地层中，发现了珊瑚的祖先、原环节动物相近的种
J． Phillips所命名，为继前寒武利亚代的地质时代，推定距今约 5.7亿到 2.3亿年。地层主要是海积层，但后来也形成有陆积层和湖积层。主要根据化石的差异，从下往上分为寒武纪、奥陶纪、志留纪、泥贫纪、石炭纪、二迭纪六部分。也有人把到志留纪部分称旧（下部）古生代，泥盆纪以后部分称新（上部）古生代。已知在志留纪后期到泥盆纪初期，二迭纪末期，世界各地曾发生过造山运动。在美洲特别是把石炭纪分为密西西比纪（下部）和宾夕凡尼亚纪（上部）。当时的气候大概是温暖的，但南美在泥盆纪和冈瓦纳大陆在二迭
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