- ￥1280 - 3850
- LMAI Bio
- 见说明书
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- LM-EL-6484
- 2025年12月03日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
38
- 供应商：
联迈生物
- 检测范围：
见说明书
- 检测方法：
双抗夹心法
- 应用：
酶联免疫分析
- 适应物种：
见说明书
- 标记物：
详询
- 样本：
血清，血浆，脑脊液等相关液体
- 规格：
96T
1. 本试剂盒用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。
2. 请在本试剂盒标记的有效期内使用。
3. 试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。
4. 如果样本值高于标准曲线最高浓度，请用检测缓冲液稀释样本，并重新检测。如果细胞培养上清样本需要较大的稀释倍数，请用细胞培养基进行适度稀释。
5. 任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、保存时间的改变，都将影响结合反应。
6. 本试剂盒在设计上去除或降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能的影响因素都已去除。
试剂盒提供的材料： 详见说明书（可咨询索要）
【酶标板准备】
1. 包被：根据资料将捕获抗体包被至最终浓度，每孔中加入100μl的包被溶液，立即用封板膜封上酶标板，置于2-8℃过夜，让其发生结合过程。倒出孔中溶液，用 300 μl 的洗液洗涤一次，洗涤过程根据下面的洗涤步骤进行。
2. 封闭：每孔加入250μl检测缓冲液，室温孵育2小时，或者2 - 8℃封闭过夜。封闭后的酶标板可置于2-8℃贮存1个星期，或者-20℃贮存2个月。封闭后的酶标板若要立即使用，请先洗涤两次，然后加入样本。
【洗板步骤】 撕掉封板膜、弃掉孔中液体，每孔加入约300μl的洗液，洗涤6次。每次洗完都要彻底移除孔中溶液。条件允许的话，加入洗液后最好300转/分钟振荡60秒，注意请勿接触酶标板的表面。每次洗涤，在吸水纸上拍干多余的洗液，洗板完成后请立即使用酶标板，或者颠倒置于湿的吸水纸上不得超过 15 分钟，不要让酶标板干燥。
【显色底物】
每孔加入100μl的显色底物。
【终止液】
每孔快速加入100μl终止液终止酶活反应。为了完全抑制酶活，终止液要均匀地覆盖微孔。加入终止液后，须立即读数，或者置于黑暗中2-8℃1个小时。测定450nm最大吸收波长和570nm 或630nm参考波长下样本和标准品的OD值。
细胞培养上清
300 g 离心 10 分钟去除沉淀物，即刻检测, 或者分装，-20℃以下贮存。
血清样本
分离管分离血清。在 1000 g 离心之前，使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃以下贮存
血浆样本
EDTA或肝素抗凝收集血浆样本。1000 g 离心 30 分钟收集样本。即刻检测，或分装，-20℃以下贮存。
辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素稀释前充分混匀。
根据标准品和待测样本的数量，用 1×检测缓冲液按 1：100 稀释浓缩的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。
血清/血浆样本标准曲线的制作：
取 150 μl 浓缩的标准品，加入 150 μl 标准品稀释液，作为标准曲线的最高浓度 (1000pg/ml)。在每一个试管中加入 150 μl 标准品稀释液。使用高浓度标准品做 1：1 系列稀释。每次移液时，请确保充分混匀。以标准品稀释液作为标准曲线的零浓度。
细胞培养上清样本标准曲线的制作：
取 150 μl 浓缩的标准品，加入 150 μl 细胞培养基，作为标准曲线的最高浓度 (1000pg/ml)。在每一个试管中加入 150 μl 细胞培养基。使用高浓度标准品做 1：1 系列稀释。每次移液时，确保充分混匀。以细胞培养基作为标准曲线的零浓度。
检测步骤:检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温。
结果计算
计算标准品和样本的平均 OD 值，然后减去零浓度标准品的 OD 值。
以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，用计算机软件进行回归拟合生成标准曲线。回归分析确定最佳拟合曲线。通过对浓度值和 OD 值取对数拟合，可以对标准曲线进行线性化。此过程可能可以得到更多样本的浓度，但数据的准确度会降低一些。
灵敏度
10个零标准品浓度 OD 的平均值加上两倍 SD，计算最低可检测浓度。
酶标板内精密度
3 个已知浓度的样本酶标板内重复测定 20 次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3 个已知浓度的样本酶标板间重复检测 6 次，评估酶标板间的精密度。
| 酶标板内精密度 | 酶标板间精密度 | |||||
| 样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| 20 | 20 | 20 | 6 | 6 | 6 | |
| 平均值 (pg/ml) | 60.1 | 155.0 | 402.8 | 64.2 | 161.7 | 410.4 |
| 标准差 | 2.7 | 3.8 | 11.0 | 4.4 | 9.9 | 16.2 |
| 变异系数 (%) | 4.4 | 2.5 | 2.7 | 6.8 | 6.1 | 3.9 |
5 份健康血清加入 3 个不同浓度水平的试剂盒，未加的血清作为本底，计算回收率。回收率的范围从 81 %至 106 %，平均回收率为 93 %。
稀释线性
5 份健康血清加入高浓度的试剂盒，并在标准曲线的动力学范围内进行系列稀释，评估检测的线性。
| 平均值 (%) | 范围 (%) | |
| 1:2 | 102 | 99-110 |
| 1:4 | 97 | 95-102 |
| 1:8 | 94 | 88-99 |
| 1:16 | 95 | 85-102 |
应用本试剂盒，检测 30 份健康志愿者的血清样本，志愿者的用药史不详。
| 样本 类型 |
检测样本 数量 |
浓度范围 (pg/ml) |
可测百分率 (%) |
可测样本平均浓度 (pg/ml) |
| 血清 | 30 | n.d. | 0 | n.d. |
注意: 此样本值范围非生理值范围。健康人样本的浓度范围因地域、种族、样本制备以及检
测人员、设备的不同而有所不同。以上数据仅供参考。
特异性
本试剂盒识别天然和重组。下述因子以 1 ng/ml 稀释于标准品稀释液中，评估交叉反应活性。下述因子以 1 ng/ml 稀释于中等浓度的标准品中，评估干扰影响。没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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文献和实验针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律，但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应，其反应过程可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图，如下所示： 延迟区：无规律可寻。 等速区：对应的是速率法，一般应用于酶活力的检测。 过渡区：对应的是固定时间法，目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。 平衡区：对应的是终点法，主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活，必须了解酶催化反应总的反应式，而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量，使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
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