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- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM604Hu02
- 2025年11月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Growth Regulated Oncogene Gamma (GROg)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验【进展|热点】Immunity: γδ T细胞抑制调节性T细胞
γδ T细胞抑制调节性T细胞 文章出处：γδ T Cells Enhance Autoimmunity by Restraining Regulatory T Cell Responses via an Interleukin-23-Dependent Mechanism. Immunity. 2010. 33:351-363 主要内容： T细胞根据其TCR链的不同可以分为αβ T细胞和γδ T细胞两类，前者是经典的T细胞，我们常规提到的T细胞指的就是αβ T细胞。γδ
T cells的分类及肿瘤特性[2] γδ T细胞的“两面性” γδ T细胞可通过直接或间接的方式起到抗肿瘤的目的。首先，γδ T细胞迁移到肿瘤局部环境后，可通过穿孔素-颗粒酶途径溶解癌细胞[8]；其次，γδ T细胞可以通过配体TRAIL和FasL消灭癌细胞[9,10]。另外，γδ T细胞还可以通过ADCC来杀死癌细胞。γδ T细胞也是IFN-γ和TNF-α重要的早期来源[11,12]。IFN-γ和TNF-α均通过多种机制抑制癌症的生长[13]。除此之外，γδ T细胞可分
，置250ml细胞培养瓶中，于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，根据细胞生长情况及时添加培养液。(2 ) TCRγδT细胞鉴定 用抗TCRγδ-FITC、抗CD44FITC和抗CD3PE与培养10天时收集的培养细胞直接染色后进行流式细胞仪检测分析，阴性对照为FITC标记的正常人IgG。(3) γδT细胞形态学观察 用数码相机拍摄培养2、10天时细胞生长状态和培养10天时的细胞的瑞氏染色后的形态并进行透射式电镜检查。(4) γδT细胞杀伤活性检测 用本室建立的乳酸脱氢酶释放法测定γδT
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