- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM387Mu01
- 2025年12月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Charcot Leyden Crystal Protein (CLC)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验域 / 折叠花样的总数是有限的。蛋白结构的模块化本质允许一级序列存在插入或删除。一般来说，结构域与功能一一对应（如 Kinase），但并不总是如此（如 TIM 桶），类似的结构可具有不同的功能 , 不同的结构可具有相似的功能。蛋白质结构与功能研究的技术路线如下：对整个技术路线，我们挑选其中的几个来讲一讲。首先就是蛋白结晶片段的选取，前面讲过，一般来说，蛋白质结构域与功能一一对应。因此，为了降低整个项目的难度（多个结构域会增加蛋白制备难度和结晶难度），通常会按照结构域选取蛋白质片段进行重组蛋白制备及结晶
质检测，例如 SPR 分析。以往为了增进目标蛋白的纯度，或进行下游分析，常常研究一个蛋白需要使用好几个不同的标签。现在有了 Strep-tag® 这个多功能的亲和标签系统，让您的蛋白研究从克隆到分析一次到位。 由于 Strep-tag® 标签蛋白的纯化在温和的条件下进行，这些靶蛋白通常被广泛的使用于： 蛋白质结构与功能研究 结晶学，鉴定蛋白质的 3D 结构 检测蛋白质-蛋白质交互作用 了解配体-受体在生理条件下的相互作用 分离活细胞、外泌体 两种 Strep 标签及配体的亲和力比较 图 3 Strep
。由于重组蛋白特性不同，纯化的高低也有差异。尽管可以通过更改纯化树脂来解决该问题，但是采用第二种纯化Tag是目前最有限的方法。尤其对于结晶学研究、免疫 和高通量分析，高纯度蛋白的获得非常重要。 适合变性或生理条件下纯化： 很难预测表达的重组蛋白是可溶性还是形成包涵体，这由启动子的强度和蛋白自身的折叠速率所决定。如果蛋白是可溶性的并具有生理功能，Strep-tag是纯化的最佳选择，因为其可以在生理条件下纯化蛋白从而保持蛋白的生物学活性。如果蛋白以包涵体形式存在，需要加入高浓度的胍
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