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- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM317Hu01
- 2026年01月05日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Perforin 1 (PRF1)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验细胞和补体活性等），以及与遗传背景可能的相互作用。 例如，β2 微球蛋白（B2m）和穿孔素（Prf1）突变会降低 NK 细胞活性；白介素 2 受体 γ 链（Il2rg）突变则使 NK 细胞完全失活；Prkdcscid 突变在 NOD 小鼠中抵抗糖尿病的发生。免疫缺陷相关靶基因及其功能：表 1. 免疫缺陷相关靶基因及其功能08 研究类型具体使用哪种类型的模型，是同种异体移植还是异种移植？接种的肿瘤细胞的生长特性如何？是免疫学研究还是肿瘤学研究？下面的表格也许可以给你一些参考。表 2. 免疫
新冠肺炎中的NK细胞功能障碍（dysfunction）及策略
是SARS-CoV-2感染的一个突出特征，两者都具有降低NK细胞毒性的能力（图2）。IL-6已被证明可直接降低穿孔素和颗粒酶B的表达，事实上，Mazzoni等人发现，血清IL-6水平与NK细胞表达颗粒酶A的频率呈负相关，特别是在重症患者中。而IL-10已被证明通过降低IFN-γ和IL-2表达而与NK细胞细胞毒性呈负相关。在病毒感染中，NK细胞毒性能力的下降导致抗原刺激的积累，使炎症永久化，并引发组织损伤。在重症COVID-19病例中，辅助性T细胞、调节性T细胞和记忆性T细胞均减少，但Th1和Th
作用，排出穿孔素（perferin）插入靶细胞膜上，并使其形成通道，而粒酶（granzymes）、TNF、分泌性ATP等效应分子进入靶细胞，导致其死亡。其中穿孔素造成靶细胞膜损伤，粒酶使DNA断裂，引起细胞凋亡（PCD）。② CTL激活后表达FasL(Fas配体),它可被释放到胞外与靶细胞表面的Fas分子结合，传导死亡信号进入胞内，活化靶细胞内的DNA降解酶，引起靶细胞凋亡。激活白介素1b转换酶（ICE）或与ICE相关的蛋白酶，引起细胞凋亡。③上述两种方式共存。 CD8+CTL是体内数量最多
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