- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM444Hu01
- 2025年12月19日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Desmoglein 3 (DSG3)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验途径。然而，对于许多水难溶性和低透膜性药物活性成分，它仍然面临着严重的挑战，如口服生物利用度低，稳定性差，缺乏合适的剂量比例等。因此，研发适当的药物制剂是提高该类药物生物利用度，增强吸收的重要途径。Zvonar[1]等首先制备了含药自微乳化系统，并通过微胶囊造粒仪结合同心喷嘴技术，以含药微乳为芯材，含乳糖胶质为壳材，成功制备了含药微胶囊。经过比较发现，含速尿药微乳微胶囊比不含药微乳微胶囊极大地增强了渗透性和释放特性。因此，通过微胶囊技术，以含药自微乳化体系为芯材，制备含药微乳微胶囊药物，是改善口服药物生物
溶液(最常用的盐体系为硫酸铵―水溶液)，对蛋白质的构象具有一定的稳定作用，所以在分离后，蛋白质可保持高的活性回收率。目前，利用HPHIC分离的蛋白质有糖蛋白、单抗、酶和基因重组蛋白质等。 HIC在近几年的研究重点： 1．新填料的合成像HPIEC一样，HPHIC的非多孔填料、灌注色谱填料和连续柱床填料相继被合成出来，这些新填料的使用大大提高了蛋白质的分离速度和分离效果。 2．蛋白质的保留机制 蛋白质在HPHIC上是如何进行保留的一直是HPHIC的一个主要研究方向。到目前
阅读器和芯片软件 . 供研究用芯片上有 6-10 芯池，不同的芯片表面上的化学物质不同，芯片表面分为两大类：一类为化学类表面，包括经典的色谱分析表面，如：结合普通蛋白质的正相表面，用于反相捕获的疏水表面，阴阳离子交换表面和捕获金属结合蛋白的静态金属亲合捕获表面；另一类称为生物类，特定的蛋白质共价结合于预先活化的表面阵列，可以用来研究传统的抗体一抗原反应， DNA 和蛋白质作用，受体、配体作用和其他的一些分子之间的相互作用 [19] . 根据检测目的不同，可以选用不同的芯片，或者自己设计
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