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- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM264Hu01
- 2026年02月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Specificity Protein 1 (Sp1)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验极其严重的病原体。分子寄生虫学主要在分子水平上研究寄生虫的发生、发展、免疫、诊断、基因结构与功能关系、疫苗和药物机制等。甲醇酵母表达系统已经被成功地应用到寄生虫领域的研究工作中。河南省农科院畜牧研究所曾利用毕赤酵母表达系统成功地使旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白的2个结构基因分泌 表达。他们的研究表明，在大肠杆菌和酵母菌中表达的重组蛋白都是研制旋毛虫基因组抗原的良好候选抗原蛋白，尤其是酵母菌表达的糖蛋白，在旋毛虫病的检测和免疫方面具有潜在 的开发应用价值。另外，已经有科学研究人员将毕赤
1. 介绍 人造锌指蛋白在生物医学研究和基因疗法中有重要应用，而且是生物化学和分子生物学研究的新工具 [ 1~3 ] 。特 别是（Cys)2 (His)2 型锌指模体（真核细胞中最常见的 DNA 结合模体）为新的 DNA 结合蛋白设计提供通用的、引人瞩目的框架。对某些 (Cys)2(His)2 型锌指蛋白-DNA 复合物揭示出这一模体与 DNA 结合的下列特征： (1 ) 锌指结构用一特异的连接子反复连接； ( 2 ) 每一个锌指结构结合到 DNA 的一个三碱基对位置上，以其
达到产生特异性条带的最大量，同时又将探针或目的蛋白与反映中其它物质非特异性结合减至最低。 二、DNA结合反应条件优化如下图： 在一支1.5ml EP管中加入如下成分，30度孵育30min，加入少量EMSA loading buffer。 1. 成分加样顺序：最主要是要注意DNA与蛋白只能在最后一步接触。DNA探针只能与非特异竞争性探针一起或在其之后加入。 2. 温度：一般均在30度，但有的蛋白如sp1，在20度较好。 3. 时间：一般孵育为10－30min，对于大部
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