- ￥600 - 2800
- ATCC/国内细胞库
- LM12640
- 中国/美国/德国/日本
- 2025年07月15日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1×10^6 细胞数/ml
- 细胞类型：
见说明书
- 品系：
见说明书
- 组织来源：
见说明书
- 相关疾病：
见说明书
- 物种来源：
小鼠源
- 免疫类型：
见说明书
- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/其它
- 器官来源：
小鼠源
- 运输方式：
活细胞/冻存管，干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）
- 年限：
3代以内
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
T25
请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。
- 收货
- T25是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。
- 离心管是用15mL离心管发货的方式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及平衡参考上述T25瓶。平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。
- 血清是用牛血清直接发货的形式，是细胞冻存管加入含有细胞的牛血清的形式。收到细胞后，拆开自封袋，冻存管表面喷75%酒精消毒后，在超净台中打开冻存管，将细胞用1mL枪头轻轻几次以将细胞吹匀，接种至含有预热的培养基的培养瓶或皿中，显微镜下观察细胞是否吹匀，如果没有吹匀，继续吹匀至3-5个细胞一团，放回培养箱继续培养。
- 干冰是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
- 如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞可以在室温下静置1-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。
- T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
- 部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。
- 细胞培养及传代
- 细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5% CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；
- 细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3mm即可）。
- 细胞培养至密度达80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3mL用15mL离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；
- 培养皿加入2-3mL无菌PBS，轻轻晃动皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；
- 加入1mL胰酶，轻轻晃动皿，使胰酶浸没到皿底所有部位，将皿盖好放入培养箱中消化；
- 若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；
- 将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。
- 部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时，可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式，不要频繁换液，大多数细胞1周换液2-3次即可。
- 细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善。
- 传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
- 细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
- 请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化。
- 细胞冻存
- 冻存液配方：建议使用92%FBS+8%DMSO，客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用，血清浓度不低于30%，DMSO含量不高于12%即可。
- 收集细胞按照以上细胞传代步骤操作至第④步后，将细胞悬液收集入15mL离心管，离心（1200rpm，3min）；
- 弃上清，加入配制好的冻存液，重悬细胞，悬液加入无菌冻存管中；
- 将冻存管在4℃静置10min，后将之正置于室温下的厚壁有盖泡沫盒中，盖紧盒盖，放入-80℃冰箱过夜，第二天放入液氮即可长期保存。
- 10cm皿的细胞长满一般可以冻存2-3管，部分细胞长的比较慢，冻存的细胞密度要稍微大点，以防止复苏后生长困难。
- 冻存液中含的DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高。部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。
- 细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即冻存时温度不能急剧下降，应控制温度缓慢下降。复苏时应快速融化，融化后尽快加入培养基中。
- 冻存时建议设置冻存检测，即取0.2-0.3mL的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一。
- 细胞复苏
- 将冻存细胞从液氮中取出后迅速放入37℃温水中摇晃融化，时间1min左右；
- 于1000rpm离心1min，弃冻存液，加入1mL新的完全培养基重悬细胞；
- 接种至新培养瓶或皿中，补加足量完全培养基，放入培养箱中培养。
- 复苏过程应迅速操作，时间不能太长。
- 复苏过程中注意污染，小心操作。
细胞培养需要耐心与细心，希望您能获得一个满意结果！
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验由于过度生长而死亡。因此制备鼠杂交瘤工作繁重且无法标准化及大规模生产。 在上世纪八十年代，制备一株鼠单抗并鉴定就可以成为一个博士论文的内容。1998 年，我们团队用新开发的兔杂交瘤融合细胞株在转基因小鼠上开展乳腺癌靶标研究，制备了上百个兔杂交瘤融合细胞的培养板。由于培养箱拥挤，一名实验员将其中的二十板杂交瘤细胞放在了其他实验室的培养箱，直到 6 周后（兔杂交瘤筛选应在 3～4 周），我在统计分析实验结果时才发现少了这二十板杂交瘤。按常理，这个时候这些杂交瘤细胞肯定全死了！但当实验员准备扔掉这二十板细胞
在液氮中保存的细胞株及体外传代培养的细胞株，都需要定期检查染色体数和抗体产生能力，因有些杂交瘤细胞会逐渐丢失染色体，使产生抗体的能力丧失或减弱。此时需及时进行克隆化，保留稳定分泌抗体的细胞株。 一、杂交瘤细胞染色体检查 材料和试剂 1. 秋水仙素。 2. 甲醇，冰醋酸。 3. Giemsa染液，玻片。 操作步骤 1. 取传代培养24h的细胞，加0.1ml秋水仙素，放37℃水浴4h。 2. 收集细胞2000r/min×10min离心弃上清，沉淀
隆抗体亚类的鉴定：将单抗培养上清液浓缩，与抗鼠IgG亚类血清作双扩散试验。 1.6 免疫转印：APT经SDS-PAGE分离，在电转移系统中将凝胶蛋白转移至硝酸纤维素膜上，分别与各株单抗反应，浸入辣根过氧化物酶标记的IgG，最终以联苯二胺系统显色［见：顾方舟主编.淋巴细胞杂交瘤技术的应用.北京：人民卫生出版社，1985：23-25］。 2 结果 2.1 杂交瘤细胞株的建立：含阳性血清小鼠的脾脏细胞与NS-1细胞融合，悬于HAT选择性培养基中接种于24孔和96孔板，5 d左右见
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
