BTN131007型中等RIPA裂解液品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应BTN131007型中等RIPA裂解液品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：BTN131007型中等RIPA裂解液品牌
英文名：RIPA Lysis Buffer(Medium)
规格：250mL
品牌：百奥莱博
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

 

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制剂	是	是	是
含磷酸酯酶抑制剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

备注：
1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

关于BTN131007型中等RIPA裂解液品牌的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·碱性胶电泳液
编号：BTN100816
英文名称：10×Alkaline Gel Buffer
规格：250mL
本品为10×的琼脂糖碱性电泳液，专门用于琼脂糖碱性变性电泳，后者主要用于分析抗核酸酶S1的DNA-RNA杂交分子DNA的大小、分析cDNA链大小、检测反转录酶合成第一条和第二条cDNA链的大小、检测分子克隆中酶的缺口活性、标定DNA缺口平移核素标记实验中试剂的用量等。

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

·生物素化的蛋白G
编号：BTN131098
英文名称：Biotin-Protein G
规格：0.5mg
本产品为生物素标记的蛋白G，可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·木材DNA提取试剂盒
编号：BTN130941
英文名称：Timber DNA extraction kit
规格：50次
本产品为生物素标记的蛋白G，可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·热敏磷酸酶
编号：BTN130655
英文名称：Antarctic Phosphatase
规格：500U
本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶，它能催化除去DNA或RNA末端的5´磷酸基团。由于磷酸酶处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5´磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

产品特点：
1．除去DNA、RNA、rNTPs和dNTPs 5´末端的磷酸基团
2．防止克隆载体的自连接
3．蛋白质丝*酸、苏*酸和酪*酸的去磷酸化
4．为5´末端标记准备模板
5．去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐
6．65℃加热5分钟可使酶完全失活

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在37℃条件下，30分钟能使1μg经HindIII(产生5´突出末端)、EcoRV(产生平齐末端)或PstI(产生5´凹陷末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。


BTN131007型中等RIPA裂解液品牌关键词：RIPA Lysis Buffer(Medium),BTN131007,中等RIPA裂解液


·石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒
编号：BTN100940
英文名称：FFPE Whole Genome Amplification Kit
规格：30次
本产品是用于从石蜡包埋组织中制备和扩增全基因组的试剂盒。通常从福尔马林固定石蜡包埋组织中得到的DNA会发生快速降解，因为使用福尔马林固定会导致DNA链断裂，碱基损坏以及发生DNA-蛋白质交联(DPC)，使以石蜡包埋组织为材料扩增基因组DNA产生极大的困难。本产品以通过修补反应，使发生损坏的DNA能够进行全基因组扩增，提高了实验效率，可以得到良好的实验结果，满足客户实验需要。

产品特点：
1．增加了一管式DNA修补处理步骤，使短片段DNA也能用于WGA。
2．即开即用，不需要单独准备所需试剂。
3．具有高保真，高产量的特点，可以扩增石蜡包埋组织的基因组达上万倍。
4．适用于各种石蜡包埋组织样品。
5．WGA产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异、微卫星差异、SNP、STR)等。
6．可与本公司石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(CAT#：70502)配合使用得到更好的实验效果。

试剂盒组成：

组份	规格
预处理液	250μL
WGA mix	300μL
phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μL
说明书	一份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用效果：
将2μL石蜡包埋组织提取的基因组DNA(不低于150 ng)加入到8μl的预处理液中，室温处理过夜，95℃处理5分钟，加入10μl WGA mix和0.5μl phi29 DNA聚合酶，混匀后30℃温育16小时后即可。

图注：用本产品扩增石蜡包埋组织DNA。三片厚度为10μm的人石蜡包埋组织(肌肉)用本公司石蜡包埋组织DNA提取试剂盒提取DNA，然后全部用于20μl体系的WGA扩增。M为DNA marker，1为阴性对照，2为样品。上样量为10μL


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·1M Tris-HCl(pH9.0)(DNA级)
编号：BTN101208
规格：250mL

·一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)
编号：BTN81212C
英文名称：One-Stop Protein Native PAGE Pack(C)
规格：30次
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。

我公司强烈推荐蛋白质研究系列产品，热情期待您的咨询选购BTN131007型中等RIPA裂解液品牌。