5-HT试剂盒

[中方名称]：5-HT试剂盒
[英文名称]：General 5-Hydroxytryptamine (5-HT) ELISA Kit
[检测原理]：采用双抗体夹心
[检测范围]：15.625-1000ng/mL
[最低检测限]：4.16ng/mL
[保存温度]：短期4℃/长期-20℃保存
[应用范围]：科研用检测试剂
[产品规格]：96T /48T
[待检样本]：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等。
（一）间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’*后一遍用DDW洗涤。
5-HT试剂盒其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
（二）双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

5-HT试剂盒洗板方法：
一、手工洗板方法：吸去(不行触及板壁)或甩掉酶标板内的液体，在实验台上烘托几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几回，将举荐的洗刷缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此进程数次。
二、自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练运用后再用到正式实验进程中。
三、特异性：本试剂盒可一同检测各方针，且与其它相关蛋白无穿插反应。
常有刚刚接触ELISA实验的新手说操作复杂，步骤化很多，不易实验。其实当我们掌握了其中的技巧与注意避免之后就会简单很多。我公司高手分析出操作要点提示，这些个实验技5-HT试剂盒巧得记牢：
1. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
2. 所有液体组分使用前充分摇匀。
3. 实验前，产品应保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
实验记录
1.所有实验的原始资料均应存档；
2.所有的记录均应规范登记在册；
3.原始登记表应记录试剂来源、批号；
4.质控血清的来源及测定值并注明是否在控；
5.签上实验者姓名及审核者姓名。
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