DNA粘转平试剂盒哪里卖

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百奥莱博专业生产供应DNA粘转平试剂盒哪里卖，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：DNA粘转平试剂盒哪里卖
产地：国产|进口
规格：20次
英文名：DNA Polishing Kit
品牌：百奥莱博
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3´到5´的聚合酶活性和5´到3´外切酶活性，将3´或5´突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。

产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

产品组成：

 

成分	规格
Pfu DNA Polymerase(3U/μL)	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：

1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：

在一个干净的离心管中，分别加入
3´或5´突出的DNA片段	10-500ng
2×Polishing Buffer	25μL
Pfu DNA polymerase	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时。

注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。

除DNA粘转平试剂盒哪里卖外，我公司正在打折促销以下产品：

·RNA溶解液
编号：BTN130505
英文名称：Buffer that dissolves RNA
规格：10mL

·5´末端同位素标记试剂盒
编号：BTN131036
英文名称：DNA 5´End-Labeling Kit
规格：20次
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：



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·柱式病毒DNA提取试剂盒
编号：BTN70701
英文名称：Virus DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在一管式病毒DNA提取试剂盒的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等)中提取微量病毒DNA的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高，通过PCR 检测到的最终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
3. 安全无毒，不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
4. 如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
5.与PCR和荧光PCR 兼容。
6. 价廉物美，性价比远高于国外同类产品。
7.适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液3.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对于液体病毒样品：在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体在4℃ 24,000 g 冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后剩下的0.2mL 用于第2 步处理。对于拭子样品：将一个拭子放入离心管中，加入1mL自备的生理盐水，振荡器上充分振荡半分钟，然后转移0.2mL 到1.5mL塑料离心管中，用于第2 步处理。
2. 加入0.6mL溶液A到第一步得到的0.2mL样品中，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 短暂离心后将500μl溶液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
4. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
5. 将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤3的离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000 rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 12000rpm室温离心1分钟(干甩)，弃含穿透液的离心管。
9. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free的1.5mL离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μl DNA 洗脱液3.0，然后室温放置2分钟。
10. 12000rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
11. DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。

疑难解答：
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA 有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR 检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。

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