单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家
产地：国产|进口
编号：BTN130551
品牌：百奥莱博
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合最新技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：


产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

表1:RT工作液

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

表2:Tailing预处理液

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

表3:Tailing工作液

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

表4:引物+水混合液

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

表5:PCR Mix

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

关于单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·中草药DNA提取试剂盒
编号：BTN60805
英文名称：Chinese herbal medicine DNA extraction kit
规格：20次
基于PCR的中药分子鉴定方法是辨别中药真伪，保证药材质量，促进中药产业现代化的十分重要的手段。但由于日晒，高温烘烤等处理极大地破坏了中药材DNA的完整性；处理过程中多酚多糖及其氧化物也会与DNA发生复杂的化学反应，所以从中药材中提取可以用于PCR的DNA 比从新鲜植物中提取要困难很多。为解决这一问题，我们公司在植物DNA提取试剂盒产品基础上开发了本产品。

产品特点：
1.适合于大多数药材。
2. 得到的DNA 纯净，OD260/280一般都在1.6以上，原液或100倍之内的稀释液一般都能直接作为PCR 模板。
3. 操作简单，整个过程只需要三十分钟左右。
4. 试剂无毒无害，环保卫生。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	15ml
溶液B	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.75mL 加入到10-15mL的塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取20mg左右的中草药，先剪成或研磨成微小的碎片，然后转移到预热的溶液A中匀浆，匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。也可以液氮研磨后将中草药粉末加入到预热的溶液A中(建议不要在陶器或玻璃研钵中研磨，因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA，降低DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。
3. 将匀浆液置于65℃水浴保温5分钟，然后全部转移到新的1.5mL塑料离心管中(此时匀浆液较为粘稠，可将枪头剪去一截后转移上清，植物碎片可倒入)。
4. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中(上清液的体积一般为200-700μl，如果体积超过700μl，多余部分可以不要)。有的上清液中会有少量细小块状物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀(溶液将呈白色混浊状)，然后置冰浴中5分钟。
6. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新离心管中。
7. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
8. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。
9. 重复*仿抽提步骤一次，此步可以有效去除含色素物质。
10. 加入0.6-1倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒30秒混匀。
11. 12000～15000g离心5分钟，弃上清，管底将有微小DNA沉淀。
12.沉淀用75%乙醇清洗2次后，室温晾干。
13. 加入50-100μl自备缓冲液(如TE)溶解沉淀。DNA 即可用于电泳，酶切和PCR等反应。如果需要测OD，则必须乙醇沉淀去除降解的RNA。
 注意:用本产品提供的RNase处理DNA样品时,做好按《分子克隆手册》等参考书上的方法彻底去除其中的DNase。


单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家关键词：Single Cell RNA Amplification Kit,BTN130551,单细胞RNA扩增试剂盒


·酪蛋白溶液(PBS)
编号：BTN131105B
英文名称：Casein Blocking Solution(PBS)
规格：250mL
即用型酪蛋白(1%)用于封闭非特异性位点。
A型：溶于TBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。
B型：溶于PBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。可用于在使用牛奶封闭背景高时作为替代品使用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·LAMP扩增阳性对照
编号：BTN130923
英文名称：LAMP Positive Control
规格：50次
本产品为LAMP扩增专用的阳性对照，用于判断、分析LAMP等温扩增结果。LAMP等温扩增，即Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)，是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品组成：

成分	规格
对照模板DNA	50μl
对照引物混合物	200μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，其中LAMP Mix(2×)、MgCl2(25mM)和Bst DNA聚合酶(8U/μL)等试剂自备(参照本公司产品100203组分)，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	阴性对照管	阳性对照管
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
对照引物混合物	4.0μl	4.0μl
对照模板DNA	不加	1μl
MgCl2(25mM)	3μl	3μl
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
水	1.5μl	0.5μl

2. 混匀，置于60-65℃保温120分钟。
3. 80℃下保温10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。


单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家关键词：Single Cell RNA Amplification Kit,BTN130551,单细胞RNA扩增试剂盒

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