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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃避光
- 保质期:
一年
- 英文名:
Western Blotting Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit
- 库存:
565
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")DAB法显色试剂盒(兔IgG)促销,我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商,立足北京,服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门,欢迎各位老师来电垂询订购。
名称:DAB法显色试剂盒(兔IgG)促销
规格:1盒
英文名:Western Blotting Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit
编号:QN1161
品牌:百奥莱博
本试剂盒主要用于western blotting的DAB显色,含有抗兔IgG酶标二抗。
SDS-PAGE电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
试剂盒组分:
封闭试剂————————————30g
10倍浓缩抗体稀释液———————50ml
酶标二抗————————————0.5ml,效价1:500~3000
20倍DAB浓缩显色液-———————5mlA+5mlB。
常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜:将膜剥离下后,作好标记,一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS,防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计,配制膜封闭液,配好的膜封闭液为乳白色悬液,将漂洗过的转印膜,封闭液内,摇床震动,室温封闭30min。用TBS-T ,PH7.6 洗液,室温漂洗3 次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水,混匀,可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步将膜沿电泳方向剪成条,分别作好标记,分开孵育。
5) 用TBS-T ,PH7.6 洗液,室温漂洗3 次每次5min。
6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量,按10ml 抗体稀释液加入10ul HRP 标记二抗的比例,配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中,加入二抗工作液,封口, 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用TBS-T ,PH7.6 洗液,室温漂洗3 次每次10min。
8) 配制DAB 显色:根据用量,取TBS-T 4ml,加入DAB 显色液A、DAB 显色液B 各200ul,混匀,加在膜正面,室温下显色。在目标条带显出后,而且背景未出时,放入水中终止显色。
注意事项:
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. western blotting DAB显色法操作简单,但其敏感性与ECL发光发有一定的差距,一般只适用于丰度较高的蛋白。
3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱,可延长抗体孵育时间。
4. 如果完全没有条带,请检查前期蛋白处理及实验过程, 如果确认无误,反复两次依旧无结果,请换用ECL发光法显色。
5. TBS-T(0.01M)配制方法:称取NaCl 8.5g ,Tris 1.21g ,用800ml 的双蒸水溶解,用盐*(代"酸")调PH 到7.6,再加入0.5ml Tween-20,用双蒸水加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)
储存条件:-20℃避光,有效期一年。
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组胺2盐*(代"酸")盐 Indoxyl-Gal 56-92-8
L-高丝*酸 N-Acetyl-L-phenylalanine 672-15-1
柠檬酸* Itaconic acid 5785-44-4
NF-222 羊抗人AFP
N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺 Citrinin 21715-90-2
阿拉西A Sunset Yellow FCF 9049-98-3
L-高*丙*酸 Ticarcillin disodiu*(代"m") salt 943-73-7
F020222 山羊抗人IgGxIgMxIgA抗体 Goat Anti-Human IgGxIgMxIgA
D-果糖-6-磷酸二* D-cellbiose 26177-86-6
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·木瓜蛋白酶
编号:QN0495
英文名称:Papain
规格:25g
本品用于抗体Fab片段的制备以及细胞分离。水解蛋白质能力强,但几乎不能分解蛋白胨。
别名:番木瓜酶;木瓜酶
CAS号:9001-73-4
分子式:21kD
酶活:80万U/g
性状:为乳白色至微黄色粉末,具有木瓜特有的气味,稍具有吸湿性。
溶解性:易溶于水,甘油,不溶于一般的有机溶剂。
储存条件:2~8℃
单位定义:25℃,pH6.2,每分钟催化分解1μmolN-*甲酰-L-精*酸乙酯(BAEE)的酶量定义为一个酶活单位。
木瓜蛋白酶是一种能水解多肽、酰胺和酯的酶。其分子由212残基的折叠多肽键组成。微有吸湿性。对光敏感。不完全的溶于水和甘油,几乎不溶于多数有机溶剂。
酶促反应:
裂解Arg-、Lys-、Phe-、X*基酸。模型底物为*甲酰精*酸乙酯(BAEE)、N-*甲酰-L-精*酸对硝基*(代"*")胺(N-α-Bz-L-Arg-4-NA)、苄氧羰酰缬*酰甘*酰精*酸对硝基*(代"*")胺(Chromozym TRY)。
激活剂及抑制剂:
激活剂有半胱*酸(Cys)、谷胱甘肽(GSH)、EDTA、还原剂、*化物。
抑制剂有汞(Hg2+)、其他重金属、碘乙酸、N-对基顺丁烯二。
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·碱性蛋白酶(1:200000)
编号:QN0508
英文名称:Alkaline proteinase
规格:100g
碱性蛋白酶是由地衣芽胞杆菌经发酵提炼而成的蛋白水解酶,主要成分为地衣芽胞杆菌蛋白酶,是丝*酸型的内切蛋白酶,能将大分子蛋白质水解成游离的*基酸等产物。碱性蛋白酶能水解蛋白质分子肽链生成多肽或*基酸,具有较强的分解蛋白质的能力。
来源:地衣芽胞杆菌
分子量:27300
活性:200U/mg
反应pH:7.0~10.0
反应温度:25~70℃
性状:浅黄色粉末或灰白光滑颗粒
溶解性:易溶于水。
储存条件:RT
酶活定义:1克碱性蛋白酶粉在pH10,40℃的条件下,每分钟水解酪蛋白能产生1微克酪*酸,定为一个酶活力单位。
·N-乙酰-D-*基葡萄糖
编号:QN0160
英文名称:Alkaline proteinase
规格:25g
CAS号:7512-17-6
·血蓝蛋白
编号:QN0274
英文名称:Keyhole limpet hemocyanin
规格:10mg|100mg|1g
本品血蓝蛋白来源于美洲鲎血淋巴(Limulus polyphemus hemolymph)。
别名:血蓝素;KLH;血兰蛋白
CAS号:9013-72-3
分子量:8000-9000kDa
纯度:Protein ≥85 % by biuret
性状:浅蓝绿色冻干粉
纯度:Protein ≥85%(by biuret)
已知杂质:0.10-0.20%
储存条件:2~8℃(冻干粉),有效期2年。配制后的溶液–20℃保存,有效期2月,在含有0.1%叠氮*的条件下2~8℃保存,请2周内使用完。
本品血蓝蛋白应用:
血蓝蛋白是在某些软体动物、节肢动物(蜘蛛和甲壳虫)的血淋巴中发现的一种游离的蓝 色呼吸色素。血蓝蛋白含两个直接连接多肽链的铜离子,与含铁的血红蛋白类似,它易于氧结合, 也易与氧解离,是已知的惟一可与氧可逆结合的铜蛋白,氧化时呈青绿色,还原时呈白色。节肢动 物中血蓝蛋白的含量比软体动物的含量要高。具有载氧功能、抗病毒活性、抗菌活性、凝血功能。 其应用广泛,可以用于生物活性测定、免疫学研究、封闭血蓝蛋白抗体。
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文献和实验两者所用的显色系统也不同。SP法与SAP法的其他染色步骤同SABC法。 Envision TM SVStemS 该法是近几年在国内推广使用的一种方法,它的原理是将多个抗鼠和抗兔IgG分子与辣根过氧化物酶结合形成聚合物。以代替传统方法的二抗和三抗,直接与特异性第一抗体结合,从而放大了抗原抗体结合的信号,使检测变得简单而且敏感性增加。经DAB显色即可完成染色,其他染色步骤与SABC法相同。 Envision TM SVStemS原理示意图
说明:这是我今年做免疫组化的一点体会,奉献给大家。如有不正确的地方,敬请指教。同时,这也是我应付《免疫组化》的一份作业,老师给了我85分。斑竹呀,如果觉得有点用,就请鼓励一下,加点分吧!:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC(Strept Actividin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性(pH=6.0-6.5),对组织和细胞的吸附性特别低,因而具有较低的背景。它的步骤
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