一站式miRNA柱式大提试剂盒北京厂家

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应一站式miRNA柱式大提试剂盒北京厂家，产品信息：

类别：RNA纯化

英文名：One-stop miRNA column large-scale extraction kit

产品名	产品编号	包装规格
一站式miRNA柱式大提试剂盒	BTN80906	5次

编号：BTN80906

规格：5次

产地：国产|进口

英文名：One-stop miRNA column large-scale extraction kit

品牌：百奥莱博

本试剂盒是在柱式miRNA提取试剂盒(BTN80104)基础上自主开发的大提升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。

 

试剂盒特点：

1.样品处理量大，一次最多可以处理2g的样品。

2.一步法直接分离纯化小RNA，比Ambion的两步法和PAGE电泳回收法更简单。整个过程只需要二十多分钟。

3. 得到的小RNA 长度大部分在200nt以下，包括 5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。

4.小RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9以上。无基因组DNA的污染。可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。

5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。

6.适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。

 

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
离心吸附柱(大提)	10套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

 

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理2 g左右的各种组织，可以在50mL塑料离心管中操作。

1. 新鲜配制裂解液20mL。将溶液A和溶液B按 1:1的比例混合(即溶液A和溶液B各10mL)，然后根据组织细胞类型的不同分为下面几种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。如果产生沉淀，需加热到65℃使其溶解后才能使用。

a)对贴壁细胞：吸尽培养液，按每10 平方厘米细胞中加入1mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。

b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，按每 1-5×106悬浮细胞中加入1mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。

c)对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每克组织加10mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL 裂解液，否则十分容易产生DNA污染。

d)对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。

e)对 RNAhold 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入50mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。

2. 将裂解物转移至一个干净的50mL塑料离心管中，然后加入0.2-0.3倍体积的自备*仿(1mL 裂解物需0.2-0.3mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。

3. 12000～15000g室温离心3～5分钟。

4. 将上清液(约12-16mL)转移到一个离心吸附柱(大提)中以去除大RNA。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下部分上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。本试剂盒提供的离心吸附柱(大提)之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附。

5. 12000～15000g室温离心离心吸附柱(大提)1分钟，收集管中的穿透液。大RNA 将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。如果需要回收大RNA，请按附录的方法操作，但需要单独购买本公司的通用洗柱液和RNA 洗脱液。

6.在穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约30mL。

7. 分一次或分两次将混合液转移到新的离心吸附柱(大提)中，每次转移后需要12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。

 注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱(大提)。

8. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱(大提)中，12000～15000g室温离心1分钟，弃穿透液。

9. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱(大提)中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。

10. 12000～15000g室温离心1分钟以甩出残留液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 miRNA的使用。

11. 将离心吸附柱(大提)转移到一自备的、50mL RNase-free 收集管中，加入0.5-1mL RNA 洗脱液。

12. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

 

附录：

1. 用 10mL自备的通用洗柱液洗涤结合有大RNA的离心吸附柱(大提)。

2. 重复上步一次。

3.干甩一次。

4. 加入0.5-1mL RNA 洗脱液，室温放置2-3分钟。

5. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为大RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

一站式miRNA柱式大提试剂盒北京厂家专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
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BTN90603C	探针标记及检测	随机引物法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
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BTN160685-25K	克隆与表达	SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒
BTN90602H	核酸电泳和回收	DNA marker(φX174 DNA/HaeIII)
BTN160681	细胞组织染色	乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(亚铁*化铜法)
BTN130535	蛋白质研究	APMSF溶液(10mg/mL)
BTN131031	基因结构和功能	人基因组DNA(男性)
BTN120503	RNA纯化	藻类RNA柱式提取试剂盒
BTN100882	核酸电泳和回收	*酚蓝溶液(电泳级)
BTN100302	蛋白质研究	包涵体蛋白溶解及复性套装
BTN60910	DNA纯化	非冻型血液DNA保存液
BTN130533	蛋白质研究	木瓜蛋白酶抑制剂溶液(0.5mg/mL)
BTN90605B	探针标记及检测	TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒
BTN90207	克隆与表达	大肠杆菌JM109感受态细胞
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BTN100884	克隆与表达	IPTG干粉
BTN100812	探针标记及检测	BLOTTO溶液
BTN121205	细胞及免疫学	CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒
BTN70904A	探针标记及检测	酵母tRNA溶液(粗提)
BTN130502	其他生化试剂	无内毒素水
BTN160101	克隆与表达	pUCm-T载体
BTN131218	核酸扩增(PCR)	GTP溶液(2.5mM)
BTN120703	克隆与表达	盐*(代"酸")万古霉素溶液
BTN131208	探针标记及检测	DNA探针变性液
BTN90404	RNA纯化	植物RNA柱式提取试剂盒2.0
BTN120421	工具酶	T4 RNA连接酶

 

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