细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluo

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)(国产,进口)，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)(国产,进口)
编号：SY0474
产地：国产|进口
英文名：Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
规格：20 rxn
品牌：百奥莱博
Annexin V-Alexa Fluor488/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor488标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝*酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝*酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor488 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

试剂盒组份：
Annexin V-Alexa Fluor488————————100 μl
PI Staining Solution (20 μg/ml)————200 μl
4×Binding Buffer————————————4 ml

注意事项
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝*酸与Annexin V-Alexa Fluor488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
5) Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

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·Alexa Fluor 488标记驴抗大鼠IgG(H+L)
编号：SY0736
英文名称：Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)
规格：100μl
本品是由Alexa Fluor 488标记的驴抗大鼠IgG（H+L），使用抗原偶联的琼脂糖微珠从驴抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的大鼠IgG分子，也会与其他大鼠免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、兔和绵羊血清蛋白经过亲和吸附处理，ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应，但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。

Alexa Fluor 488的光谱性质同FITC，Amax（最大激发波长）为493nm，Emax（最大发射波长）为519nm。本品适合做多标实验，广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学（ICC），流式细胞术（FC）以及免疫组化（IHC）等。

浓度：0.75 mg/ml
缓冲液：0.005M 磷酸*，0.125M *化*， pH 7.6
稳定剂：7.5mg/ml BSA（无IgG，无蛋白酶），50% 甘油
防腐剂：0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例：1:50～400（适合多数实验）
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

·支原体去除试剂(2000×)
编号：SY0548
英文名称：Treatment (2000×)-Mycoplasma Elimination Reagent
规格：1ml
在细胞培养过程中，支原体污染常有发生，但由于其特殊性很难被肉眼和显微设备检测到，因此做好支原体的预防工作显得尤为重要。可通过向培养基中添加支原体预防试剂，来有效预防支原体的污染。

由于支原体无细胞壁，传统的抗生素一般对其无效，而本产品结合了常用的对支原体具有抑菌作用的抗生素，经优化配比制备成混合制剂，其核心成分是喹诺酮类、四环素衍生物类和大环内酯类抗生素。本产品在支原体去除试剂的基础上，对三种抗生素的浓度进行了进一步优化，确保在抑制支原体生长的同时，不会对细胞造成伤害。本品为2000×母液，使用时需稀释至1×工作液浓度，具体使用方法与细胞培养过程中添加双抗的方法一致。

储存条件：-20℃避光，保质期18个月


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ARB12299 大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)elisa检测 Rat anti-endomysial antibody iga,ema iga ELISA KIT
BL1436 1M Tris-HCl(PH=8.0)
CYB167049 兔抗羊IgG
BTN130413 肝素琼脂糖 Heparin Agarose
BOC-S-Trityl-L-半胱*酸 Clofibric acid 21947-98-8
ARB13891 猪传染性胃肠炎抗原(TGE-Ag)ELISA代测服务 
ARB11370 人前列腺素E1(PGE1)定量分析 Human prostaglandin e1,pg-e1 ELISA KIT
D0302 脱纤维绵羊血(无菌 袋装)
辛酸* (-)-Lobeline hydrochloride 1984-06-1
9041-37-6 Sephadex LH-20 (葡聚糖凝胶LH-20)
ARB10025 人5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)酶标法分析 Human 5-hydroxyindolacetic acid,5-hiaa ELISA KIT
ARB10549 human皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)elisa测定使用说明书 Human cutaneous t cell-attracting chemokine,ctack ELISA KIT
SJ0091 Ciprofloxacin 环丙沙星
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·小牛肠碱性磷酸酶
编号：SY0388
英文名称：Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
规格：1000U
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

来源：携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（Quality Control）：无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（Thermal Inactivation）：在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用*酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定义：在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基*(代"*")酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH（Optimal pH）：该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
储存条件：-20℃

使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
无菌ddH2O————Up to 50µl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2µl
10×AP buffer————5µl
【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。

2 酚*仿法抽提DNA
① *酚/*仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② *仿/异戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。

4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。

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