北京现货His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂特价优惠

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂特价优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂特价优惠
规格：10ml
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：SY0393
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（可耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

基质（Matrix）：高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压（Tolerance Pressuremax）：0.3MPa, 3bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
储存条件：4℃保存，有效期2年

使用方法

（一）纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表2。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表3。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）
1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液至离心管中，10000rpm，4℃离心20-30min。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶，5000rpm离心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：对于大量体积的上清，需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）
1）将培养液转移至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体去上清。
2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。
3）将破碎液转移至离心管，10000rpm，4℃离心20-30min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。
4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。
5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 装柱
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2）将树脂悬浮，小心地将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如达不到推荐的压力或流速，可以用所用泵的最大流速，这样也可以达到一个较好的装填效果。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱体积的去离子水。标上柱床高度。【注】：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%。
5）关闭泵，关闭层析柱出口。
6）如使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如需要可重新调整分配器。

4 样品纯化
装柱后，可用各种常规的中压色谱系统，以AKTA使用为例进行说明：
1）将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞，连接至色谱系统中，打开下出口，将纯化柱连接到色谱系统中，注意旋紧。
2）3-5倍柱体积去离子水冲洗纯化柱。
3）至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。1ml规格预装柱推荐流速为1ml/min，5ml预装柱推荐流速为5ml/min。
4）利用泵或注射器上样，收集流出液，以便SDS-PAGE检测蛋白结合情况。【注】：若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
【注】：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7）建议用更高浓度咪唑（如500mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

5 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni2+脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液，接触时间为1-2h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。

2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa），填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：
1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱体积；
2）去离子水清洗5倍柱体积；
3）2%SDS清洗3倍柱体积；
4）去离子水清洗5倍柱体积；
5）乙醇清洗5倍柱体积；
6）去离子水清洗5倍柱体积；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱体积；
8）去离子水清洗5倍柱体积；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱体积；
10）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

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·Elk1-GFP报告基因质粒
编号：SY0212
英文名称：Elk1 GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
ELK1-GFP报告基因是用于检测ELK1转录活性水平为目的的报告基因。ELk1(ETS domain-containing protein )是一种三元复合因子，是ETS家族的一类。它在各种生理活动中具有重要的作用，包括长期记忆的形成，药物成瘾，老年痴呆症，唐氏综合征，乳腺癌，和抑郁症。

ELK1-GFP报告基因主要应用于MAPK信号通路的研究、药物研究以及相关基因的调控和功能的研究等。

pGMELK1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ELK1结合位点，可以高效地检测ELK1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得ELK1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM ELK1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMELK1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·快速核酸银染试剂盒
编号：SY0274
英文名称：Rapid Silver Stain Kit for Nucleic Acid
规格：1000ml
分子生物学实验中，常利用银染的方法显示聚丙*(代"烯")酰胺凝胶或者琼脂糖凝胶中的核酸条带，其检测原理是：银离子(Ag+）可与核酸形成稳定的复合物，随后Ag+ 在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒，后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比EB高达200倍，常用于检测SSR标记、SNP标记等。

常规的银染方法由固定、氧化、染色、显影、终止等若干个步骤组成，操作十分繁琐，尤其不适用于大批量实验。而本品的推出可大大改善上述问题，主要体现在：1）超快速，整个过程仅需20分钟；2）操作简单，只有染色和显影两步；3）灵敏度跟常规方法相当，比EB高200倍，能检测到10ng的DNA条带。4）两个成分都是现用现配，可重复性好。

按照本方案提供的配制方法，共可配制试剂A和试剂B分别1000ml。

产品组份：

 

组分名称	规格	外观
试剂A 1	2g	干粉
试剂A 2（10×）	100ml	液体
试剂A 3（10×）	100ml	液体
试剂B 1（10×）	100ml	液体
试剂B2	5ml	液体

注意事项：
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）银染主要出现在PAGE胶的表面，因此该方法更适合用于薄胶（0.5-0.75mm）的检测。
3）染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm。
4）凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。
5）PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。
6） 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是几步漂洗过程不够彻底，或染色过程温度太低。
7）较深的银染背景多是丙*(代"烯")酰胺中的杂质所致。
8）室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
9）染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
10）银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
11）影响硝酸*(代"银")染色效果的因素很多，其使用容器的材质也是一个非常重要的因素。通常玻璃平皿是最理想的银染容器，其化学性质极其稳定，几乎不与银染试剂中的任何成分发生反应，且不具有吸附染料的特性。其次是医用搪瓷盘，瓷釉为无机玻璃质材料，能耐各种浓度的无机酸(包括强氧化性酸)、有机酸、弱碱和强有机溶剂，但不耐酸、碱介质交替使用，而常规银染法就是酸碱介质交替使用，因此搪瓷盘银染效果不如玻璃平皿。塑料种类较多，如果塑料是由含*基官能团的有机物（脲、三聚*胺或*代三聚*胺）与醛类（主要是甲醛）化合物经缩聚反应而得，则这种塑料会在碱性溶液中与有强还原作用的甲醛发生反应，进而使甲醛消耗，减弱银离子与蛋白的结合，降低显色敏感度和显色速度。

操作方法

1 配制试剂A（以100ml为例）
所需要配制的试剂A（即染色液）的体积跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。本方案以配制100mL试剂A为例进行详述，请根据具体凝胶大小，确定实际所需染色液用量，再按比例改变各组分用量。
以100ml试剂A为例，在一干净烧杯中加入下列组分搅拌混匀即可。试剂A需要新鲜配制。
去离子水：80 mL
试剂A1：0.2 g
试剂A2：10 mL
试剂A3：10 mL

2 配制试剂B（以100ml为例）
所需要配制的试剂B（即显色液）的体积跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。本方案以配制100ml试剂B为例进行详述，请根据具体凝胶大小，确定实际所需试剂B用量，再按比例改变各组分用量。
以100ml 为例，在一干净烧杯中加入下列组分搅拌混匀即可。试剂B需要新鲜配制。
去离子水：89.5 mL
试剂B1：10 mL
试剂B2：0.5 mL

3 染色
1）PAGE电泳结束后，将PAGE胶转移到装有去离子水的瓷盘中，进行漂洗，2min/次，共2次。
2）将PAGE胶转移到适当体积的试剂A，使试剂A在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温染色10min。
3）倒掉试剂A，用去离子水快速漂洗2次，每次30秒。
4）将PAGE胶转移到适当体积的试剂B，使试剂B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到颜色显现，一般需要10min左右。
5）将PAGE胶置于适当背景下照相。


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ARB11360 人类组织相容性复合体I类相关基因B(MICA)血清中含量检测 Human micb ELISA KIT
9037-22-3 支链淀粉 Amylopectin
9008-02-0 牛血红蛋白 Hemoglobin
BL1291 SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
(S)-2-*基甘*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Amikacin sulfate salt  13226-98-7
ARB11543 人疱疹病毒6型抗体(IgM)含量检测 
BTN131144 山羊抗小鼠IgG(H+L),碱性磷酸酶标记 Goat Anti-Mouse IgG(H+L),AP Conjugate
HC0127 硝酸纤维素膜(NC)
SJ0769 麦芽侵粉
ARB11672 人维生素D结合蛋白(DBP)检测服务 Human vitamin d-binding protein,dbp ELISA KIT
BTN3150 RNA电泳液,10× RNARUN Buffer, 10×
硅烷偶联剂KH560 D-(+)-Raffinose pentahydrate 2530-83-8
ARB10360 人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)ELISA检测服务 Human heart fatty acid binding protein,h-fabp ELISA KIT
低聚异麦芽糖 Fmoc-D-Val-OH 499-40-1
葡萄糖氧化酶 Sephadex G-50 9001-37-0
ARB11040 人环氧合酶-2(COX-2)Elisa定量检测 Human cyclooxygenase-2,cox-2 ELISA KIT
ARB10630 人血清素/血清胺(ST)代做ELISA实验 Human serotonin,st ELISA KIT
BTN100302 包涵体蛋白溶解及复性套装 Inclusion Body Protein Solubilization & Refolding Pack
盐*(代"酸")丫黄素 Potassium L-Aspartate 8063-24-9
ARB14063 豌豆凝集素(PSA)检测服务 Pisum sativum agglutinin,psa ELISA KIT
ARB10187 人αN已酰*基葡糖苷酶(αNAG)含量分析 Human αn-acetylglucosaminidase,αnag ELISA KIT
13755-38-9 硝普* Sodium Nitroprusside
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·HNF1-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0130
英文名称：HNF1 Luciferase Reporter Plasmid
规格：1μg
HNF1-Luc荧光素酶报告基因质粒（HNF1 luciferase reporter plasmid）是用于检测HNF1转录活性水平为目的的报告基因。HNF1((hepatocyte nuclear factor 1)是HNFs家族的主要成员之一，是调控肝功能基因表达的重要转录因子，对促进肝脏发育和维护肝细胞生物学功能发挥重要作用。

HNF1-Luc荧光素酶报告基因质粒主要应用于Hepatocyte Nuclear Factor 1信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMHNF1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个HNF1结合位点，可以高灵敏度地检测HNF1的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得HNF1报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



使用说明
pGMHNF1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

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