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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 灵敏度:
高
- 供应商:
瓦兰生物
- 检测范围:
不限
- 检测方法:
酶联免疫法
- 应用:
科研单位
- 适应物种:
不限
- 标记物:
HGV Ab
- 样本:
液体
- 库存:
大量
- 规格:
96T
庚肝抗体 (HGV Ab),ELISA,酶联免疫试剂盒
庚型肝炎病毒(HGV),又称为GB病毒C(GBV-C),是一种与肝炎相关的病毒,属于黄病毒科。尽管HGV的致病性尚未完全明确,但其与肝脏疾病、免疫反应及其他病毒感染的相互作用引起了广泛关注。检测HGV抗体(HGV Ab)对于评估感染状况和监测疾病进展具有重要意义。
一. ELISA(酶联免疫吸附测定)原理
ELISA是一种广泛使用的免疫检测技术,用于定量或定性分析样品中抗原或抗体的存在。其基本原理如下:
1.抗原-抗体特异性结合:
- 在ELISA实验中,HGV抗原(通常是HGV的某一特定蛋白)被固定在ELISA板的孔中。这些抗原可以是重组蛋白或天然提取的蛋白。
2. 样品添加:
- 将待测样品(如血清或血浆)加入孔中,样品中的HGV抗体(HGV Ab)会与固定在板上的HGV抗原结合。
3. 洗涤步骤:
- 通过洗涤去除未结合的成分,以减少背景信号,提高实验的特异性和准确性。
4. 加入酶标记的二抗:
- 加入与HGV抗体结合的酶标记的二抗(通常是针对人类免疫球蛋白的抗体),该抗体会与结合的HGV抗体形成复合物。
5. 底物反应:
- 加入底物溶液,酶会催化底物反应,产生可测量的信号(如颜色变化)。
6. 信号测定:
- 使用酶标仪在适当波长下读取反应产生的信号强度,信号强度与样品中HGV抗体的浓度成正比。
二. 实验步骤概述
1:涂板:在ELISA板上涂布HGV抗原,固定抗原。
2:样品添加:加入待测样品,结合HGV抗体。
3:洗涤:去除未结合的成分。
4:加入酶标记的二抗::与结合的HGV抗体形成复合物。
5:底物反应:加入底物,生成可测量的信号。
6:读取结果:使用酶标仪测定吸光度,计算样品中HGV抗体的浓度。
三:结果分析
通过绘制标准曲线(基于已知浓度的标准品),可以计算样品中HGV抗体的浓度。结果通常以浓度(如ng/mL)表示,或以阳性/阴性结果报告。
四:总结
HGV Ab ELISA试剂盒利用抗原-抗体特异性结合的原理,通过酶催化反应生成可测量的信号,实现对样品中HGV抗体的定量检测。这一方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
试剂盒组成
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注:标准品浓度依次为:20、10、5、2.5、1.25、0 ng/mL.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
- 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
- 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
- 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
- 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
- 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
- 灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
- 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性:板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
- 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
- 有效期:6个月
免责声明
- 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
- 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
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