北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格的品牌：百奥莱博，是优质的细胞及免疫学产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多植物线粒体纯化试剂盒B(精提)等细胞及免疫学产品请联系我司咨询订购。

名称：北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格
规格：5次
产地：国产|进口
英文名：Plant Mitochondria Purification Kit(B)
品牌：百奥莱博
编号：BTN111208B
植物线粒体是重要的植物细胞器，负责ATP的产生。此外植物很多重要的特性(如雄性不育)也跟线粒体相关，是母系遗传研究的重要材料。对植物线粒体进行生化和遗传研究都需要进行线粒体纯化。本产品就是专门用于植物细胞线粒体纯化的试剂盒。

产品特点：
1．即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2．提供AB 两种进过优化的操作方法，A法利用常规台式冷冻离心机的差速分离原理进行线粒体粗提，所得线粒体含少量其他细胞器污染，可用于后续的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白组分析，也可以用于PCR级别的线粒体DNA和RNA提取。
3．B法利用冷冻超速离心(离心力达40000g)制备的密度梯度来将线粒体粗提液中的线粒体和其他细胞成分进一步分开，得到线粒体精提液，适用于后续的偶联分析、体外线粒体蛋白合成、线粒体成份定位等精细实验。也可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析和测序级别的线粒体DNA和RNA提取。
4．本产品足够5次提取，每次可处理10g绿色植物组织(可得1-2.5mg左右线粒体)或20g非绿色植物组织(可得2-5mg左右的线粒体)。

试剂盒组成：

 

成分	5T(A型)	5T(B型)
匀浆液	250ml	250ml
洗涤液	250ml	250×2
密度梯度离心介质	无	175ml
BSA干粉	5g	10g
带柄尼龙筛	1只	1只
软毛笔	1只	1只
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用植物组织，器皿和溶液均需要在4℃预冷。任何情况下线粒体的温度都不要超过4℃。

一、选择组织
1．植物组织不同，线粒体产率不同，请以下表为参考：

植物组织种类	线粒体产率	说明
根和块茎	0.3mg/10g	如土豆，红薯等
黄化苗(下胚轴、子叶、胚芽鞘)	2-5mg/10g	多酚含量低于叶片
有光合作用的叶片和子叶	1-2.5mg/10g	需放置在暗处3天

2．一般纯化最好选用用黄化苗。如果用绿色组织(如叶片)，需将植物提前放在暗室至少3 天以降低淀粉含量，否则淀粉颗粒将干扰线粒体的纯化。
3．一次实验需要40mL匀浆液、约90mL洗涤液和35mL梯度离心介质。这些溶液用前均需要加入BSA干粉使其终浓度为0.1%(100mL溶液加0.1g BSA干粉，轻柔颠倒混匀或搅拌溶解后放冰上预冷待用)。每次实验用多少配多少，不要预先将所有BSA干粉加入，否则容易长菌。

二、线粒体粗提(A法)
1．将10 g的绿色植物组织(如去叶脉后的嫩叶子，愈伤组织)或20 g干净的非绿色植物组织(如发芽组织、根、块茎等)浸泡在冰水中10分钟，用纸吸干液体后浸泡在预冷的40mL匀浆液(需先加0.1% BSA)中，在浸泡状态
下剪成1cm2大小的碎片。注意：如果样品可分成多组平行处理，得到线粒体粗提物后再汇集，否则线粒体产率将急剧降低。
2．将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到Waring 匀浆器中，中速匀浆3次，每次15秒，每次之间间隔10秒以便让碎片沉淀下来到刀片处。也可使用研磨法。具体操作是将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到预冷的研钵中，研磨3-4分钟。注意：植物组织匀浆后释放的物质会使匀浆液酸化，降低pH，而线粒体对pH变化非常敏感，因此建议匀浆后用pH试纸检测匀浆液的pH，如果低于7.0，必须用自备的5 M KOH 将pH调到7.0以上才进入下一步。
3．用带柄尼龙筛过滤匀浆液，穿透液可通过预冷的漏斗收集到预冷的50mL的塑料离心管中。
4．在低速固定角度冷冻离心机上4℃ 1000 g离心5分钟，沉淀为未破碎的细胞、破碎细胞的碎片、细胞核和淀粉颗粒，上清含线粒体。小心转移上清到新的预冷的50mL塑料离心管中。
5．将装上清的离心管在水平冷冻离心机上4℃ 12000 g离心20分钟，弃上清液，所得棕绿色沉淀即为纯化的线粒体粗提物。有时沉淀底部还有白色的淀粉沉淀，属于正常现象。
6．加入10mL预冷的洗涤液(需先加0.1% BSA，下同)中，用软毛笔轻柔重悬线粒体沉淀(如果最地下有白色淀粉沉淀，需要避免重悬之)。不能剧烈震荡，否则线粒体容易破裂。
7．将线粒体重悬液转移到新的50mL离心管中，再加入30mL预冷的洗涤液(终体积为40mL)中，4℃ 1000 g离心5分钟。线粒体将在上清中。
8．将上清转移到新的预冷的50mL离心管中，4℃ 12000 g离心20分钟，沉淀为线粒体。小心弃上清。到此步时，线粒体回收率一般在15-30%。
9．在沉淀中加入2mL预冷的洗涤液。用软毛笔轻柔重悬，得到线粒体粗提液。如果有平行提取，可将最多4 管线粒体沉淀重悬在2mL 洗涤液中。线粒体粗提液中线粒体的回收率一般在45-75%。
10．所得线粒体粗提液含其他细胞器(如类囊体膜，质体，过氧化物酶体，乙*(代"醛")酸循环体,或细菌)污染，但可直接用于PCR级线粒体DNA和RNA的提取、呼吸链功能测定，、蛋白浓度测定和线粒体精提。如果需要长期保存，则可以在线粒体重悬液中加入1/20 体积的自备DMSO，混匀后分成0.5mL/管，然后放-80℃保存。如此保存的线粒体酶活性和膜完整性在几年内都不会发生变化。

三、细胞核DNA的去除(纯化测序级的线粒体DNA 才需要进行此操作。本产品不提供相关试剂，实验步骤仅供参考)
11．预留50μL 线粒体粗提液做对照，在约2mL 剩余的线粒体粗提液中加入40μL 25mM的MgCl2，再加入200ug DNase干粉或溶液(总量为200ug即可)，混匀后冰上放置60分钟降解DNA。取少量样品(如50μL)在PCR仪器中加热到95℃变性10分钟，再取其中的10μL和10μL预留的样品一起进行细胞核基因专一性PCR，如果DNase处理的样品没有扩增，而预留样品有扩增，则表明DNA 去除比较干净(达到PCR 检测的极限)，则进入下一步。如果未去除干净，则继续在冰上放置，直到PCR 检测不到细胞核DNA。
12．加入0.32mL预冷的0.5M的EDTA溶液和40mL预冷的洗涤液。
13．4℃ 1000 g离心5分钟，将上清转移到新的预冷的50mL离心管中，4℃　12000 g离心20分钟，沉淀为去除细胞核DNA的线粒体。重悬在2mL 洗涤液中。

四、线粒体精提(B法，需要40000g的超速冷冻离心机)
14．在50mL预冷的塑料离心管中先后加入35mL预冷的密度梯度离心介质(需先加0.1%BSA)。
15．将2mL 线粒体粗提物重悬液铺在密度梯度离心介质上。
16．在超速水平离心机上4℃ 40000g离心45分钟，最上层为黄色或橙色的质体带(如果材料是绿色植物，此带将是绿色)，其下的白色不透明的带即为线粒体，管底沉淀为过氧化物酶体。其示意图如下：

17．用广口吸管(可将1mL 蓝抢头中间剪断后使用)收集线粒体带，注意避开其上的质体带过氧化物酶体沉淀，估计所取含线粒体溶液的体积。
18．在15-20分钟的时间内缓慢加入至少4倍体积的预冷的洗涤液。
19．转入50mL塑料管离心管中，在冷冻离心机上4℃ 15000g离心20分钟，沉淀为线粒体。
20．将线粒体沉淀用软毛笔小心重悬在至少4倍体积的预冷的洗涤液中，在冷冻离心机上4℃ 15000g离心20分钟，弃上清，沉淀即为洗涤后的线粒体精提物。到此步时，线粒体回收率一般在5-15%。
21．将精提的线粒体重悬在1mL预冷的洗涤液中。重悬的线粒体可以立即使用，在冰上最多可放置5-6小时。如果需要长期保存，则可以在线粒体重悬液中加入1/20 体积的DMSO，混匀后分成0.5mL/管，然后放-80℃保存。如此保存的线粒体酶活性和膜完整性在几年内都不会发生变化。

五、线粒体后续处理(本产品不提供相关试剂，实验步骤仅供参考)
22．DNA提取：离心得线粒体沉淀，再按常规的SDS-蛋白酶K酶解，酚*仿抽提，乙醇-盐沉淀的方法制备线粒体DNA。
23．RNA提取：离心得线粒体沉淀，再按常规的Trizol方法制备线粒体RNA。
24．总蛋白提取：按细菌总蛋白提取方法。
25．线粒体内膜，外膜、基质纯化：需要从本公司定做相关产品。
26．其他功能检测：需咨询本公司技术人员是否可以定做相关试剂。

欲了解更多北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:

·一站式miRNA柱式提取试剂盒
编号：BTN80104
英文名称：One-stop miRNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。

试剂盒特点：
1.一步法直接分离纯化小RNA，比两步法(先分离总RNA和再纯化其中的小RNA)和PAGE电泳回收法更简单。得到的小RNA长度大部分在200nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 柱式操作，比miRNA提取试剂盒更加简单快捷，整个过程只需要十多分钟。
3.适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
4.小RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9以上。
5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6. 无基因组DNA的污染。
7.可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	100套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理100mg左右的各种组织，可以在1.5mL塑料离心管中。如果处理样品量大，请分成很多相当于微量提取的量进行，最后再收集在一起。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合，然后根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/mL裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
d)对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
e)对 RNAhold 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL裂解物需0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到一根离心吸附柱中以去除大RNA(最好标记以跟后面要用的专门吸附小RNA的另一离心吸附柱区别开来，本试剂盒提供的离心吸附柱之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附)。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 12000～15000g室温离心半分钟，收集管中的穿透液。大RNA 及DNA将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。但由于离心吸附柱的最大吸附能力为40μg动物RNA，20μg植物RNA，如果样品中的大RNA含量高于上面数值，则穿透液中将同时含有大RNA和小RNA，在此情况下，穿透液需要再次重复上柱以去除大RNA。由于此时离心吸附柱已经吸附了大RNA，所以需要预处理(具体步骤见本手册最后的附录)。
6.在最后得到的不含大RNA的穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约1.5mL。
7. 先转移约0.75mL 到一新的离心吸附柱中。注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱。12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 将上步上柱剩余的样品转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。此步一般可以省略。
11. 12000～15000g室温离心半分钟以甩出残联液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响miRNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μLRNA 洗脱液。
13. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

附录：
1. 将结合有大RNA和DNA的离心吸附柱中加入0.1mL自备的超纯水,12000～15000g室温离心半分钟，弃收集液。
2. 再加 0.1mL自备的超纯水，重复上步一次。
3. 将第5 步的得到、需要进一步去除其中大RNA和DNA污染的穿透液直接上柱，12000～15000g室温离心半分钟，收集穿透液(此穿透液含小RNA)。
4. 如果大 RNA 已经去干净，可以直接进入第6 步；如果大RNA 没有去除干净，则用本附录1-2的方法处理离心吸附柱，然后再将此穿透液加入(接本附录第3 步)。一般样品只需要额外处理一次就可以去除全部的大RNA污染。


北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格关键词：植物线粒体纯化试剂盒B,BTN111208B,精提,Plant Mitochondria Purification Kit(B),植物线粒体纯化试剂盒B(精提)


·抑*肽酶溶液(5mg/mL)
编号：BTN130536
英文名称：Bestatin Solution
规格：5mL
本产品为5mg/mL抑*酶的甲醇溶液，工作浓度为40μg/mL(130μM)。抑*肽酶(Bestatin)，又称*肽酶抑制剂、乌*美司(ubenimex)，分子量是308.4，是一种竞争性的蛋白酶抑制剂，可抑制*肽酶B、白*酸*基肽酶、三肽*肽酶和哺乳动物细胞表面的*基肽酶等蛋白酶的活性，不能抑制羧肽酶。

储存条件：低温 运输，-20℃保存，有效期一年。

·TRIzol试剂伴侣
编号：BTN81027
英文名称：TRIzol-Mate
规格：50次
TRIzol是用于总RNA提取(主要是动物总RNA提取)的著名产品，具有广大的客户群。但其缺点之一是一直没有柱式升级产品，客户仍然要使用既繁琐又费事的非柱式操作(另一缺点是不能用于富含多糖和多酚的材料)为解决此问题，我们特推出本产品，其操作流程如下：


产品特点：
1. RNA 质量更好，因为操作简短减少了RNA在提取过程中的降解。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 1.9以上，比经典 TRIzol法得到的更纯。
3. 专门的洗涤条件能有效去除基因组 DNA，进一步减少其对 RNA的污染。
4.适用于其他基于酸酚/ 异硫*酸胍提取原理的RNA提取产品，包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent等。
5.可以省略*仿处理步骤，避免接触有毒试剂(但效果稍差)。
6.跟TRIzol 结合使用，把经典操作变成了柱式操作，简化了实验流程，用户可以节约30分钟的时间。

产品组成：

成分	规格
溶液A	50ml
硅胶膜离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：


使用方法：
1. 按 TRIzol的使用说明书进行总 RNA提取到加*仿之前一步。
2. 如果需要加*仿，则继续按TRIzol的使用说明书操作，用*仿处理裂解液离心后得到上清液。如果省略*仿处理步骤，则需要将裂解物直接离心。
3. 将经过*仿处理得到的上清液或没有经过*仿处理直接离心得到的裂解液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：如果是经过*仿处理，则离心后，下层有机相和中间层将含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
4. 加入等体积的溶液A，颠倒混匀 30秒。
5. 根据混合物的多少，一次或分两次转移到离心吸附柱中。
6. 每次转移后，需要13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
7. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL 通用洗柱液重复此步一次。
8.室温离心半分钟。此步对去除残留通用洗柱液十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的质量和使用。
9. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μl RNA 洗脱液。
10.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
11. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
12. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
13. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我公司的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的说明书进行操作。


北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格关键词：植物线粒体纯化试剂盒B,BTN111208B,精提,Plant Mitochondria Purification Kit(B),植物线粒体纯化试剂盒B(精提)

γ-谷*酰-3-羟基-4-硝基*(代"*")胺单胺盐 Methyl β-D-glucopyranoside 63699-78-5
ARB10181 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa测定使用说明书 Human α1-acid glycoprotein,α1-agp ELISA KIT
ARB10087 人C反应蛋白(CRP)定量分析 Human c-reactive protein,crp ELISA KIT
ARB12837 小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)酶联免疫定量检测 Mouse macrophage inflammatory protein 2,mip-2 ELISA KIT
DR0101 琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒
SJ0646 M-MLV
碳酸* HPC 554-13-2
F030822 BIOTIN标记兔抗人IgG FC抗体 Rabbit Anti-Human IgG(FC)*BIOTIN
ARB11989 大鼠L-鼠乳酸脱*酶(L-LDH)含量检测 Rat l-lactate dehydrogenase,l-ldh ELISA KIT
鲁米诺单*盐 Cholesterol esterase from pseudomonas sp 20666-12-0
ARB11673 人维生素E(VE)elisa测定使用说明书 Human vitamin e,ve eELISA KIT
ARB13191 小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)定量分析 Mouse ghcagons-like pepfide 1,glp-1 ELISA KIT
ARB10329 人内毒素(ET)酶联免疫定量检测 Human endotoxin,et ELISA KIT

我公司强烈推荐细胞及免疫学系列产品，热情期待您的咨询选购北京植物线粒体纯化试剂盒B(精提)价格。