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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输、4℃保存(溶液B成分二需-20
- 保质期:
长期
- 英文名:
Fungal Total Protein Miniprep Kit
- 库存:
579
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")真菌总蛋白质微量提取试剂盒哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:真菌总蛋白质微量提取试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
英文名:Fungal Total Protein Miniprep Kit
品牌:百奥莱博
编号:BTN81202
本产品专门用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法,适合于各种形态的各种酵母材料。
产品特点:
1.破壁效率高,能达到80-90%。
2.可以处理各种酵母样品。
3.操作简单,得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分析。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 100ml |
| 溶液B成分一 | 50ml |
| 溶液B成分二 | 1.5g |
| 玻璃珠,400μm | 5g |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输、4℃保存(溶液B成分二需-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
准备工作:将溶液B成分二(干粉)全部加到50mL溶液B成分一中,充分摇晃使之全部溶解,成为溶液B,然后分装成小分(体积根据每次实验的样品数决定)并放-20℃长期保存。
1.将酵母细胞接种到5mL YPD培养基中,30℃摇晃(250rpm/分钟)过夜培养使其OD600达到0.5~2.0。
2.把酵母细胞培养物转到装有2mL预冷溶液A的10-15mL离心管中,混匀。
3.4℃,5000g离心5分钟沉淀酵母细胞,吸出上清液。
4.用30μL溶液B悬浮酵母细胞,并快速转移到1.5mL塑料离心管中。
5.100℃下保温3分钟,使蛋白酶失活,样品存放于-20℃。
6.加入0.1g的玻璃珠。
7.在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。
8.加入70μl溶液B,稍加振荡,置100℃保温1分钟。
9.取5-20μl抽提液上样直接进行SDS-PAGE凝胶电泳。
关于真菌总蛋白质微量提取试剂盒哪里卖的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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甘*酸乙酯盐*(代"酸")盐 Magnesium dodecyl sulfate 623-33-6
002002 无菌脱纤维兔血 100ml|500ml
BL0954 胶体金标记羊抗大鼠IgG抗体
114-07-8 红霉素 Erythromycin
BTN3150 RNA电泳液,10× RNARUN Buffer, 10×
3671-99-6 葡萄糖-6-磷酸二* D-Glucose6-phosphate
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异抗坏血酸* Metronidazole 6381-77-7
ARB13735 兔脂蛋白*(代"磷")脂酶A2(Lp-PLA2)含量分析 Rabbit lipoprotein-associated phospholipase a2 ,lp-pla2
CYB161068 人血清IgM(液体)70~80%纯度,4mg/ml浓度
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硝酸益康唑 CTAB 24169-02-6
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ARB14177 人胃泌素17(G-17)检测服务 Human Gastrin17 (G-17) ELISA KIT
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真菌总蛋白质微量提取试剂盒哪里卖关键词:Fungal Total Protein Miniprep Kit,真菌总蛋白质微量提取试剂盒,BTN81202
·沉淀型TMB显色试剂盒
编号:BTN101106
英文名称:Precipitated TMB Chromogenic Kit
规格:100mL
TMB因其灵敏度较高及无致癌性而得到广泛应用。本产品采用稳定敏感的配方,辣根过氧化物酶接物反应时产生一种深蓝色的沉淀产物,适用于Western Blot及其适用于蛋白质杂交和免疫化学,以及原位杂交染色等。即开即用,性能稳定,操作便捷,敏感度高,显色清晰,重复性好。
产品特点:
1.相对于DAB来说,灵敏度高。
2.色泽稳定,无须避光显色。
3.色带为蓝色,便于观察。
4.无毒环保,可以放心使用。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 100ml |
| 溶液B | 100ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃避光保存,有效期一年。
使用方法:
一、免疫印迹染色
1.准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤
2.加入1滴溶液A和1滴溶液B,铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。
3.置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2-5分钟,直至深蓝色沉淀出现。
4.用镊子夹起固相膜,放入去离子水中清洗。
5.空气中晾干。
6.拍照记录。
二、免疫化学染色
1.准备好含有待测蛋白的组织切片:包括固着、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。
2.加入1滴溶液A和1滴溶液B,铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。
3.室温下,小心加入上述显色工作液使其铺满整个切片样品表面。
4.室温下孵育5-10分钟,或直至样本出现深蓝色。
5.小心移去切片上显色工作液。
6.室温下,小心将切片置入50 毫升PBS缓冲液中浸泡5秒。
7.小心移去切片上的PBS缓冲液。
8.放上盖玻片或封片。
9.(选择步骤)进行甲基绿复染。
10.立即在一般光学显微镜下观察:阳性呈现深蓝色。
注意事项:
1.加入1滴溶液A和1滴溶液B,可按比例增减
2.如果封闭欠佳,易造成背景颜色过深
3.固相膜显色后数小时将会褪色,不能永久存在。
4.该显色液只能用于辣根过氧化酶(HRP)标记的杂交和沉淀反应。
5.染色后可用甲基绿或苏木素复染,增强对照。
疑难解答:
Q:在ELISA底物反应过程中,为何有些孔呈蓝色,而另外的孔呈蓝绿色?
A: 这是TMB底物反应过程中的正常现象,不影响实验结果。这是由于辣根过氧化物酶的浓度过高引起的,建议降低二抗的浓度。
Q:ELISA 显色时为何孔中会出现沉淀?
A:HRP浓度过高,建议降低二抗-HRP浓度或加入100μL 冰醋酸以溶解沉淀。
Q:如何降低背景读数?
A:建议降低一抗或二抗浓度,延长封闭时间。
真菌总蛋白质微量提取试剂盒哪里卖关键词:Fungal Total Protein Miniprep Kit,真菌总蛋白质微量提取试剂盒,BTN81202
·*酚蓝溶液(电泳级)
编号:BTN100882
英文名称:Bromophenol Blue Solution
规格:10mL
*酚蓝分子式为C19H10Br4O5S,分子量为669.97,CAS号为115-39-9。易溶于*氧化*溶液,溶于甲醇、乙醇和*酚,是一种pH指示剂,在pH3.0(黄)~4.6(蓝紫)范围,颜色由黄变蓝。本产是*酚蓝的1%水溶液,用作制备常用做电泳指示染料,其泳动率在0.5-1.4%琼脂糖中,相当于300bp dsDNA,在8% PAGE变性胶中相当于20bp dsDNA。如果含*酚蓝的上样液跟样品混合后变黄,则表示样品中酸性物质没去除干净,必须用1M Tris pH8.8调到*酚蓝呈蓝色,否则蛋白将向相反方向移动。
储存条件:常温运输及避光干燥保存,有效期一年。
·一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
编号:BTN90317
英文名称:One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
规格:30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。
产品特点:
1.一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。
产品组成:
| 成分 | 规格 | 保存 |
| 电泳级尿素 | 210g | 常温 |
| 电泳级丙*(代"烯")酰胺 | 77.34g | 常温 |
| 电泳级甲叉双丙*(代"烯")酰胺 | 2.67g | 常温 |
| 10×TBE电泳液 | 250ml | 常温 |
| 电泳级TEMED | 1.5ml | 4℃,避光 |
| 电泳级过硫*(代"酸")铵 | 1g | 常温 |
| 2×尿素-PAGE上样液 | 1ml | -20℃ |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,保存条件见上表,有效期一年。
使用方法:
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29:1(丙*(代"烯")酰胺:甲叉双丙*(代"烯")酰胺)的交联度,
在此条件下,DNA片段和最适PAGE浓度对应关系如下:
| 单链DNA长度 | 最佳PAGE浓度 | 二甲*青FF迁移率 对应的长度 |
*酚蓝的迁移率 对应的长度 |
| 50-400nt | 8% | 160nt | 45nt |
| 200-1000nt | 5% | 260nt | 65nt |
| 750-2000nt | 3.5% | 460nt | 100nt |
二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量,配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A:新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1 克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP 管中,摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B:新鲜交联度为29:1的40%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液,下同):在装有77.34 g电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙*(代"烯")酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙*(代"烯")酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C:配尿素-PAGE胶:在一个250mL的三角瓶中,先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
| PAGE胶浓度 | 各成分用量(尿素为克,其余单位是mL) | 补水到(mL) | ||
| 尿素 | 40%AB溶液 | 10×TBE缓冲液 | ||
| 5% | 42 | 12.5 | 5.0 | 100 |
| 6% | 42 | 15.0 | 5.0 | 100 |
| 7% | 42 | 17.5 | 5.0 | 100 |
| 8% | 42 | 20.0 | 5.0 | 100 |
| 9% | 42 | 22.5 | 5.0 | 100 |
| 10% | 42 | 25.0 | 5.0 | 100 |
| 11% | 42 | 27.5 | 5.0 | 100 |
| 12% | 42 | 30.0 | 5.0 | 100 |
D:搅拌溶解,然后用滤纸过滤。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应),无条件也可以不脱氧。
E:加入500μL 10%APS和100μL TEMED,迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子,用0.5×TEB液冲洗加样孔。
三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品:将样品跟上样液1:1 混合,95℃ 3分钟变性,然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品:可以直接上样。
四:电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线,打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热,这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压,产热都将随电泳时间而变化,不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率,大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳,取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意:如果银染,必须延长固定时间以便让洗出尿素,否则残留尿素会干扰后面的银染。
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