动植物膜蛋白微量制备试剂盒(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

动植物膜蛋白微量制备试剂盒(国产,进口)是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多动植物膜蛋白微量制备试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：动植物膜蛋白微量制备试剂盒(国产,进口)
编号：BTN91204
英文名：Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
细胞膜蛋白质参与了很多重要的细胞活动，根据它们与膜结合的位置一般分为两种，一种是附着在细胞膜上，另一类是嵌入到细胞膜中间。附着型膜蛋白疏水性较弱，比较容易提取和纯化；而嵌入型膜蛋白疏水型很强，所以在水溶液里面很难溶解，非常难以提取和纯化。百奥莱博根据上述特点，经过精心优化的、开发出本产品，专门用于分离纯化这两种膜蛋白。

产品特点：
1. 两步法提取，先纯化含膜组分，再分离附着型膜蛋白和嵌合型膜蛋白。
2. 膜蛋白(附着型+嵌入型)产量高，对肝脏组织而言，其线粒体膜蛋白产率为10μg/mg左右，过氧化物酶体为1μg/mg左右，内质网为25-30μg/mg。
3. 所得的膜蛋白大部分具有生物活性，可用于活性研究。
4.可用动物、植物培养细胞和实体细胞为材料，也可用预先纯化的含膜组分或细胞器(如线粒体、叶绿体、内质网、过氧化物酶体)为材料(本试剂盒不含纯化细胞器的试剂)。
5. 本方法重复性好。
6. 本试剂盒足够50次微量提取，分A型和B型两种。A型用于附着型膜蛋白，B型用于嵌合型膜蛋白和附着型膜蛋白。

试剂盒组成：

 

成分	A型	B型
溶液A	100ml	100ml
溶液B	10ml	10ml
溶液C	50ml	100ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对培养细胞：收集1×107个培养细胞(动物细胞、植物细胞)，用20mL自备的冰浴的PBS 洗涤三次，每次洗涤后需要4℃下1000 g离心2分钟，然后小心弃上清。对实体组织：由于各种动植物的各种实体组织的属性差别太大，故本手册的纯化膜组分的操作步骤(第1-7 步)不一定完全适合，用户需要自行优化以纯化含膜组分或含膜的细胞器(如细胞质膜、内质网、线粒体、叶绿体等)，再将含膜组分或细胞器沉淀直接用于第8 步的膜蛋白提取。
2. 将洗涤后的细胞沉淀重悬在2mL溶液A中，冰上静置10分钟。注意：膜蛋白有膜的保护，在纯化过程中对蛋白酶的降解没有胞浆蛋白敏感，一般可以不加蛋白酶抑制剂。但如果纯化的膜蛋白的确有降解的话，可以在溶液A中加入自备的蛋白酶抑制剂混合物。
3.转移到容积为2mL的Dounce 玻璃匀浆器上下匀浆20-50次(具体次数取决于细胞种类，293T细胞一般需要20次左右，而MEF细胞一般需要50次左右。最好用样品先进行预实验以摸索最佳匀浆次数，最佳匀浆次数时在显微镜下能看见细胞破裂但细胞核完整)。
4. 将匀浆液转移到15或50mL塑料管中，加入相当于匀浆液体积1/10的溶液B，其间可以轻柔颠倒混匀3-5次，留少量样品作为对照1(匀浆液)。
5. 4℃ 2500rpm离心20分钟，沉淀为细胞核，上清为胞浆和膜成分，留少量样品作为对照2(胞浆和膜成分)。
6. 将上清液用Beckman Optima 台式超速离心机100,000 g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该为100,000g，否则有可能得不到膜成分沉淀。
7.小心转移上清(胞浆部分)并留少量样品作为对照3(胞浆)。
8. 将沉淀(含膜组分)重悬于1mL 冰浴的溶液C中后，冰上静置30分钟，留少量样品作为对照4(膜成分)。本成分电泳前，需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%)，再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中待用。对照1-3 号不需要这样的预处理。
9. 用Beckman Optima 台式超速离心机100,000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
10. 如果需要附着型膜蛋白，则取上清(含附着型膜蛋白)弃沉淀(含膜和其中的嵌合型膜蛋白)。上清可以放-20℃长期保存，如果需要电泳，需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%)，再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中与对照1-4 号一起上样电泳。
11. 如果需要嵌合型膜蛋白，则取出上清(含附着型膜蛋白)并留少量样品作为附着型膜蛋白样品，然后再用1mL 冰浴的溶液C重悬沉淀，然后100,000g 4℃离心60分钟，去掉上清(上清含残留的附着型膜蛋白，可以留样作为洗涤后的附着型膜蛋白样品)。沉淀含膜和其中的嵌合型膜蛋白。如果需要测定膜蛋白的浓度，则将其溶解在自备的0.5 M NaOH溶液。

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·亲和素
编号：BTN131085
英文名称：Avidin
规格：10mg
本产品为母鸡卵清糖蛋白冻干粉末，亲和纯化，脱盐处理。它结合能力为11-15μg生物素/mg亲和素，等电点10～10.5，在很宽的pH和温度范围稳定。

产品应用：
➤作为与生物素化的酶结合或用于标记酶的免疫分析试剂。
➤作为富含生物素组织切片的封闭蛋白(使用0.1%来抑制内源生物素)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·大肠杆菌HB101化学感受态细胞
编号：BTN81221
英文名称：E.coli HB101 Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 HB101菌株是E.coli K12菌株与E.coli B菌株的杂合产物(同时也是Stbl3的原始菌株)。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20 背景使HB101缺失内切酶系统，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。本产品是采用大肠杆菌HB101特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 具有链霉素抗性。
2.基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-)recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。
4. 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃倒置培养12-16小时。

注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5000rpm，1分钟)收菌后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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·DNA促旋酶
编号：BTN130651
英文名称：DNA Gyrase(E.coli)
规格：100U
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶，在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在30μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。


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ARB12553 大鼠胱天蛋白酶3(CAsp-3)定量分析 Rat caspase 3,casp-3 ELISA KIT
ARB13434 鸡可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)elisa测定使用说明书 Chicken soluble endothelial protein c receptor,sepcr ELISA KIT
福氏完全佐剂 β-Glucuronidase
Fmoc-L-天冬酰胺 ONPG 71989-16-7
ARB11666 人维生素B6(VB6)ELISA代测服务 Human vitamin b6,vb6 ELISA KIT
9041-36-5 葡聚糖凝胶G-200 Sephadex G-200 medium
一水肌酸 L-Glutamine 6020-87-7
PY02-450  葡萄糖琼脂  250克  
葡聚糖凝胶G-100 T3 RNA Polymerase 9050-94-6
BL0875 羊抗BSA免疫血清
ARB11264 人骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)血清中含量检测 Human bone morphogenetic protein receptor 1a,bmpr-1a ELISA KIT
ARB12933 小鼠丝*酸/苏*酸蛋白*(代"磷")酸酶(STK)代做ELISA实验 Mouse serine/threonine protein kinase,stk ELISA KIT

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