大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞现货
产地：国产|进口
英文名：E.coli XL1-Blue Chemical Competent Cell
编号：BTN90504
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌XL1-Blue菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。该菌株适用于高效的DNA 克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定复制；适合非甲基化DNA的转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。本感受态细胞具有四环素抗性。

菌株的基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac[F- proAB laclqZΔ M15 Tn10(Tetr)]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

关于大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞现货的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
BL1119 碘化丙啶PI溶液(1mg/ml)
F020217 兔抗猴IgG抗体 Rabbit Anti-Monkey IgG
103476-89-7 Leupeptin   亮抑酶肽(分装)
64285-73-0 3,3",5,5"-四甲基联*(代"*")*(代"胺")二盐*(代"酸") TMB 2HCL
PY06-008  弧菌显色培养基  1000ml，用于弧菌属细菌的快速分离与鉴别
2-(4-**氧基)-2-甲基丙*(代"酸") RT 882-09-7
ARB13299 小鼠糖蛋白130(gp130)尿液中含量检测 Mouse glucoprotein 130,gp130 ELISA KIT
E0401 抗凝马血(无菌 pet瓶装)
ARB12578 大鼠高密度脂蛋白(HDL)定量分析 Rat high density lipoprotein,hdl ELISA KIT
1-亚硝基-2-*酚 AMEO 131-91-9
PY02-308  结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂  250克  
ARB14251 人狂犬病毒抗原(RV-Ag)Elisa方法检测 
ARB13803 豚鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)elisa检测 
PY08-062  10%*化*胰蛋白胨大豆肉汤 10ml  20支/盒，用于金黄色葡萄球菌的选择性增菌培养
大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞现货关键词：大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞,E.coli XL1-Blue Chemical Competent Cell,BTN90504


·2×YT培养基(干粉型)
编号：BTN100821
英文名称：2×YT Medium Powder
规格：250g
2×YT的全称是2×Yeast Extract and Typeptone，就是表示其成分是LB broth的2×，主要用于繁殖M13噬菌体。本产品加水灭菌后即得液体培养基，即可使用。配制一升液体培养基需要50g本产品。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·柱式病毒DNA提取试剂盒
编号：BTN70701
英文名称：Virus DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在一管式病毒DNA提取试剂盒的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等)中提取微量病毒DNA的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高，通过PCR 检测到的最终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
3. 安全无毒，不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
4. 如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
5.与PCR和荧光PCR 兼容。
6. 价廉物美，性价比远高于国外同类产品。
7.适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液3.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对于液体病毒样品：在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体在4℃ 24,000 g 冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后剩下的0.2mL 用于第2 步处理。对于拭子样品：将一个拭子放入离心管中，加入1mL自备的生理盐水，振荡器上充分振荡半分钟，然后转移0.2mL 到1.5mL塑料离心管中，用于第2 步处理。
2. 加入0.6mL溶液A到第一步得到的0.2mL样品中，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 短暂离心后将500μl溶液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
4. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
5. 将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤3的离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000 rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 12000rpm室温离心1分钟(干甩)，弃含穿透液的离心管。
9. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free的1.5mL离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μl DNA 洗脱液3.0，然后室温放置2分钟。
10. 12000rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
11. DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。

疑难解答：
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA 有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR 检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。


大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞现货关键词：大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞,E.coli XL1-Blue Chemical Competent Cell,BTN90504


·XTT细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
编号：BTN140635
英文名称：XTT Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit
规格：500次
XTT能被活细胞里的线粒体脱*酶降解而产生橙黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。XTT与MTT同属四唑氮衍生物，它们检测细胞活性的反应原理相似，原理图如下：


产品特点：
1．盒灵敏度，可检测低细胞密度样品，检测结果的重复性优于MTT。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲基产物。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。

使用方法：
下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。

㈠、接种细胞
1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。
2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。
3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。
4．将细胞稀释到2.5×10³个/mL～5×10⁴个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10⁴个/mL。
5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。
6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。
 注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。
7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11列反应的影响。
8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。

㈡、药物处理
9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。
13．按常规方法把96孔板继续放在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。
14．处理结束后去除第2到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。
15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。

㈢、存活细胞计数
16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。
 注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。
17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。
19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。
20．计数同样处理的各次重复的平均值。
21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为100%)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。
 注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。

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