蜗牛酶干粉现货

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百奥莱博专业生产销*(代"售")蜗牛酶干粉现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：蜗牛酶干粉现货
英文名：Snail enzyme,powder
规格：5g
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本品是从蜗牛(Helix pomatia)的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有β-glucoronidase、endo-β-glucanase、arylsulphatase、纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶，呈褐色结晶粉末。可以用于真菌细胞核酸和蛋白质制备、原生质球制备等。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：(处理酵母细胞举例)
1.配制山梨醇缓冲液(10mL)：1.82g山梨醇、0.042g柠檬酸*，用10mL pH5.8的磷酸*缓冲液溶解，涡旋震荡混匀，超净台中，滤器过滤除菌。
2.取5mL 山梨醇缓冲液加入到装有1g蜗牛酶的棕色瓶中，轻轻摇动混匀，务必使蜗牛酶完全溶解，使用之前用枪头挑一下瓶底，看是否有未溶解的酶，若有沉淀，则继续摇动或用枪头吹吸，使其溶解，得到的溶液为浓度是200mg/mL的蜗牛酶溶液。
3.取3-5mL酵母细胞，200μL无菌水洗涤菌体(吹吸重悬)，室温10000rpm离心1min，弃上清。重复洗涤2-3次。
4.将酵母细胞重悬于300-500μL巯基化合物中，32℃水浴15-30min。期间轻轻颠倒离心管两三次。
5.室温10000rpm离心1min，弃上清。将沉淀重悬浮于500μl山梨醇缓冲液中。
6.按照每克细胞30-40mg蜗牛酶的比例，加适量体积的第2步配制的蜗牛酶溶液到酵母细胞溶液中，37℃保温1小时。(破壁率一般达90%以上。)
7.4℃保存或直接用于核酸、蛋白质提取制备。

附：巯基化合物配制方法
巯基化合物(0.04M EDTA和0.14M β-巯基乙醇)(30mL)：

 

试剂	剂量
0.5M EDTA	2.4ml
巯基乙醇(分析纯ρ=1.11439g/mL)	294μl
无菌水	27.3ml

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·印迹膜抗体稀释液
编号：BTN81208
英文名称：Antibody Dilution Buffer
规格：250mL
本产品用于稀释Western Blot抗体，即开即用，方便快捷。

产品组成：

成分	规格
抗体稀释液成分一	100ml
抗体稀释液成分二	0.5g
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、转膜(湿法电转移，本产品不含相关试剂)
1．制备湿法电转液：将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液，用时用去离子水稀释20倍预冷待用。
2．根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。
3．将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。
 注意：最好用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上，只让膜下层不转移液接触，通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中，否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。
4．在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。
5．在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。
 注意：每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸绝对不能相互接触，否则电转移时会发生短路，烧坏装置。
6．合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向，转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负；转印带正电荷的蛋白质时，电极方向是膜负胶正)，然后用预冷的转移液灌满转移槽。
7．插上电极，一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。
 注意：一定要检查电流的大小，电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间，对于小分子量的蛋白，转膜时最好垫2张或更多张膜(最多可10 张)，即使白质已经转过了第一张膜，还会在其它膜上检测到；对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，时间也要延长一点，开始最好也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低，可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。
8．终止转移后，取出膜，幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。

二、封膜(本产品不含相关试剂)
1．将膜转移至杂交袋中，加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。
2．室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。

三、与一抗二抗结合
1．用5mL Western抗体稀释液(配制方法：将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中，溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用，最佳稀释倍数跟一抗效价相关，需摸索)。
2．剪开杂交袋的一角，倒去封膜液，加入5mL新鲜稀释的一抗溶液，加热密封杂交袋开口。
3．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。
4．用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。最佳稀释倍数跟二抗效价相关，需摸索)。
5．剪开杂交袋的一角，倒去一抗溶液(可留存)，加入5mL新鲜稀释的二抗溶液，加热密封杂交袋开口。
6．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟，也可过夜孵育。
7．剪开杂交袋的一角，倒去二抗溶液(可留存)。
8．剪开杂交袋，用镊子取出膜，用Western洗膜液在器皿中洗3次，每次10分钟。
9．根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。

四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗，本产品A型，本产品不含相关试剂)
1．将膜平放，在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B，铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。
2．置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，直至深蓝色条带出现。
3．用镊子夹起膜，放入去离子水中洗膜3次终止反应，每次30分钟。
4．空气中晾干后照相保存。
 注意：膜显色后的颜色在数小时后将会褪色，不能永久存在，故需要及时照相。

五、AP显色检测(对AP标记的二抗，本产品B型，本产品不含相关试剂)
1．用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。
2．将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中，每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法：将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。
3．室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。
4．显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应，每次30分钟。
5．用吸水纸吸干膜上的水分，避光干燥保存或在一周内照相。

六、Western抗体清除剂(说明：此处理可能会使蛋白质失去某些表位，本产品不含相关试剂)
1．将膜浸泡在Western抗体清除剂中，70℃摇晃孵育30分钟，去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次，每次10分钟。
2．膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。


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·dNTP溶液(标记专用)
编号：BTN100210
英文名称：dNTP Solution
规格：0.5mL
本产品包含dATP、dCTP、dGTP的混合物和dTTP两个成分。浓度为每种10mM。可与带标记的dUTP结合使用，用于DNA探针的标记。

产品组成：

组份	规格
dNTP(无dTTP),10mM	375μL
dTTP,10mM	125μL

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

北京百莱博科技有限公司是DNA纯化产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购蜗牛酶干粉现货。