柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法)北京厂家现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法)北京厂家现货，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法)北京厂家现货
规格：50次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Yeast DNA Column extraction kit(Glass bead method)
酵母DNA提取是一个难题，因为酵母有很厚的细胞壁，比较难以破碎。本产品是液氮研磨法柱式酵母DNA提取试剂盒的姊妹产品，它利用玻璃珠法破碎细胞，主要用于从酵母细胞中提取DNA(液氮研磨法柱式酵母DNA提取试剂盒采用液氮研磨法破碎细胞，适用于从酵母菌丝体中提取其基因组DNA)。

产品特点：
1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援酵母DNA(注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源酵母DNA污染，用于提取酵母DNA往往会造成污染。这些文献可从本公司本产品介绍网页下方下载)。
3. 本方法提取一个样品只需要10余分钟，方便、快速和高效。
4.一次可以处理5mL的过夜酵母培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20 kb左右，每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
酸洗玻璃珠，400 um	25g
溶液A	25mL
溶液B	25mL
溶液C	75mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液	10mL
使用手册	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 对菌液：取3-5mL过夜培养的酵母菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的酵母菌落，转移到装有1mL水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到离心管中，然后进入下一步操作。
4.在材料中加入无菌水1mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
5.沉淀中加入500μL溶液A和0.5克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟。
6. 加入500μL的溶液B，涡旋震荡，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。或者每管0.3mL，分别转移到2-3个1.5mL的干净的塑料离心管中。
7.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
8.在离心吸附柱中加入500μL通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液。
9. 重复上步操作一次。
10. 12000rpm空柱离心1分钟。
11. 加入50-100μL DNA洗脱液，室温放置1分钟以上，12000rpm离心1分钟，穿透液即为酵母DNA样品。
12. 为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。


更多有关柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法)北京厂家现货的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·10%Sarkosyl溶液(DNA级)
编号：BTN100914
规格：250mL

·石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒
编号：BTN100940
英文名称：FFPE Whole Genome Amplification Kit
规格：30次
本产品是用于从石蜡包埋组织中制备和扩增全基因组的试剂盒。通常从福尔马林固定石蜡包埋组织中得到的DNA会发生快速降解，因为使用福尔马林固定会导致DNA链断裂，碱基损坏以及发生DNA-蛋白质交联(DPC)，使以石蜡包埋组织为材料扩增基因组DNA产生极大的困难。本产品以通过修补反应，使发生损坏的DNA能够进行全基因组扩增，提高了实验效率，可以得到良好的实验结果，满足客户实验需要。

产品特点：
1．增加了一管式DNA修补处理步骤，使短片段DNA也能用于WGA。
2．即开即用，不需要单独准备所需试剂。
3．具有高保真，高产量的特点，可以扩增石蜡包埋组织的基因组达上万倍。
4．适用于各种石蜡包埋组织样品。
5．WGA产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异、微卫星差异、SNP、STR)等。
6．可与本公司石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(CAT#：70502)配合使用得到更好的实验效果。

试剂盒组成：

组份	规格
预处理液	250μL
WGA mix	300μL
phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μL
说明书	一份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用效果：
将2μL石蜡包埋组织提取的基因组DNA(不低于150 ng)加入到8μl的预处理液中，室温处理过夜，95℃处理5分钟，加入10μl WGA mix和0.5μl phi29 DNA聚合酶，混匀后30℃温育16小时后即可。

图注：用本产品扩增石蜡包埋组织DNA。三片厚度为10μm的人石蜡包埋组织(肌肉)用本公司石蜡包埋组织DNA提取试剂盒提取DNA，然后全部用于20μl体系的WGA扩增。M为DNA marker，1为阴性对照，2为样品。上样量为10μL


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·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH8.0)(不含RNase)
编号：BTN170103
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL

·链霉亲和素
编号：BTN131021
英文名称：Streptavidin
规格：1mg
本产品为通过亲和层析纯化获得高纯度链霉亲和素。链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa，一条完整的SA肽链中有159个*基酸残基，一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10 mol/L 数量级，这一性质常用于分子生物学用途。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(FPG)
编号：BTN130644
英文名称：Formamidopyrimidine DNA Glycosylase
规格：500U
Fpg(甲酰胺嘧啶[fapy]-DNA糖基化酶)也称作8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG)，既有N-端糖基化酶活性也有AP-裂解酶活性。N-端糖基化酶活性可以切下双链DNA上受损的嘌呤碱基，产生一个脱嘌呤(AP)位点。AP-裂解酶活性可以切割AP位点的3´或5´端，因此可以除去AP位点，产生一个具有3´和5´磷酸的碱基缺口。被Fpg识别并切除的受损碱基包括：7,8-二羟基-8-氧代鸟嘌呤(8-氧代鸟嘌呤)、8-羟基腺嘌呤、fapy-鸟嘌呤、甲基-fapy-鸟嘌呤、fapy-腺嘌呤、黄曲霉毒素B1-fapy-鸟嘌呤、5-羟基-胞嘧啶和5-羟基尿嘧啶。

产品特点：
1．单细胞凝胶电泳(彗星试验),彗星试验的推荐稀释倍数,1:10³～10⁴；
2．碱性析出；
3．碱解旋；
4．修饰的切刻平移技术。

产品组成：

成份	规格
Fpg(8000U/mL)	62.5μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl反应体系中，37℃ 1小时，能够切割1pmol含单个与胞嘧啶配对的8-氧代鸟嘌呤的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。



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·ATP溶液(2.5mM)
编号：BTN131216
英文名称：ATP Solution，2.5mM
规格：2mL
ATP分子式为C10H13N5O13P3Na3，分子量是573.1，消光系数为15.4×103 M-1×cm-1(pH7.0)，λmax为259nm。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·SSPE溶液，20×
编号：BTN100809
英文名称：Saline-Sodium Phosphate-EDTA
规格：250mL
20×的SSPE含3M NaCl、0.2M NaH2PO4、0.02M Na2EDTA，pH为7.4。它是一种在核酸分子杂交中广泛使用的溶液。其特点首先是盐浓度接近饱和，可以非常方便地稀释到不同浓度，提供不同的杂交和洗涤严谨度。其次，高盐浓度可以抑制微生物生长，便于长期放置。最后，它可以用于几乎所有核酸杂交试验。由于缓冲能力比SSC强，更适合于需要稳定pH的实验。

储存条件：常温运输及保存、有效期两年。

·端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
编号：BTN111009
英文名称：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
规格：50次
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。

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