动物线粒体DNA提取试剂盒 DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖动物线粒体DNA提取试剂盒 DNA纯化在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：动物线粒体DNA提取试剂盒 DNA纯化
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：50T/100T
储存条件：2～8℃，有效期一年。使用前，在DNA酶I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，分装后-20度保存。线粒体裂解液使用前常温保存，如有沉淀可37度水浴溶解，不影响使用。
三，说明
线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心到比较纯净的线粒体，再利用DNA酶消化裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA，最后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。
本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞线粒体DNA的提取制备。不适合植物及其他标本的提取。
四，操作步骤
准备工作：在DNA酶I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，适当分装后-20度保存。线粒体裂解液保存于常温，如有沉淀37℃水浴溶解，离心机温度下降到4℃（2-8℃），如无低温离心机，也可以常温离心，并将离心时间为10min的改为5min，但最后所得DNA品质及产量可能会有一定影响。
1. 样本处理
a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次；
b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次；
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；
3. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min。
4．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；
5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min；
6．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
7. 加入100ul DNA酶反应液重悬线粒体，吹打均匀后，再加入10ul DNA酶I溶液（见准备工作），混匀，37度水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃， 12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清，再加入200ul TE 重悬线粒体沉淀，离心，洗去残留的DNA酶。
8.得到的沉淀，用100ul TE 重悬线粒体沉淀。加入200ul线粒体裂解液，轻轻混匀（不可吹打），放置2min左右，不超过5min，再加入150ul蛋白沉淀液，迅速混匀。4℃， 12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。
9．取上清，加入一新的离心管中（可选用等体积的酚*仿异戊醇25:24:1抽提一次，再用*仿抽提一次，或者直接用*仿抽提两次，一般来说，此步可省，并不影响后续的PCR），加入0.6倍体积的异丙醇（如无异丙醇，可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA）及10ul 核酸核酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右（此步可省），4℃， 12,000 × g 离心10 min。
10. 弃上清，再加入1ml 70%乙醇，4℃， 12,000 × g 离心10 min。重复用70%乙醇洗一次。
11. 弃上清后再次离心1min 吸弃上清，开盖凉干约5-10分钟。
12．加入20-30ul TE缓冲液,轻弹管底，37度水浴5分钟，线粒体DNA溶解。
13. 进行DNA电泳检测及-20度保存，进行下步的实验。
四 注意事项：
1. 为保证获得完整及尽可能多的线粒体，匀浆条件要示：第一是全程低温操作。第二是快速。第三，如用条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2．线粒体DNA本身含量很低，如果电泳检测不到，可加大上样量，用更少量的TE溶解沉淀，或者直接进入PCR检测。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
转速与离心力换算
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；
[rpm] ２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。

更多有关动物线粒体DNA提取试剂盒 DNA纯化的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
C0101 胎牛血清(无菌过滤)
加拿大树胶 POPOP 8007-47-4
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BL1060 乙酰胺琼脂
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ARB13944 猪促卵泡素(FSH)ELISA代测服务 Porcine follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
ARB10553 人孕酮受体(PGR)含量分析 Human progesterone receptor,pgr ELISA KIT
BOC-L-酪*酸 Erythromycin 3978-80-1
CYB162031 羊抗人IgM(μ链特异)(抗血清) 0.5ml
C1801 巴比西鼠血清(无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
62640-02-2 NADP Na2   氧化型辅酶Ⅱ
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·膜封闭液
编号：XH077
规格：100ml
我公司生产的Western Blot膜封闭液采用经典的脱脂奶粉加入PBS本制，加入侵。02%的叠氮*，适于在Western Blot实验中封闭转印膜上非蛋白质结合部位，减少一抗及二抗蛋白的非特异性结合，将实验背景降到最低。该封闭液对 Nitrocellulose、PVDF、尼龙膜等各种转印膜均有较强的封闭效果。
此试剂一般现订现生产，客房拿到手后须一个月内使用。为节省成本，本产品一般可反复使用两到三回。

·TMB单组分显色液
编号：XH083
规格：100ml/500ml
产品介绍：
TMB主要应用于酶联免疫吸附实验（ELISA)，经典的方法是采用AB液分开配制，使用前再混合的方法，但我们产的单组分TMB显色液，采用独特的配方，一种组分就可以显色，并且长期存放稳定。如果客户以前没听说过或者不太相信此产品，可以在离心管中直接取100ul稀释过的酶标二抗，再加入100ul此显色液，混合后试一下。
本产品特点：
即用型：无需混合，方便快捷，减少误差
灵敏度高：不低于A.B液
稳定性好：+2-8°C保存，有效期不低于24个月；显色终止后读数稳定
背景低：底物溶液在650nm检测时检测OD值小于0.04
质量可靠：产品批间差小
外观：本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅黄色
使用方法：
用适当的干净容器（用纯净水反复冲洗），倒出适量的单组分TMB显色液，待达到室温后即可使用。
加液：加完HRP结合物并温育一定时间后，洗板3-5次，每孔加TMB显色液100ul。 根据个人实验需要，在室温（15-25°C）或37°C下温育10-30分钟。
终止：加等体积的1M 盐*(代"酸")或硫*(代"酸")溶液终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。
读数：终止反应后30分钟内在450nm处读数。
注意：如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数；或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。


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HC0193 记号笔(黑色)油性
亚甲基蓝 Oxalacetic acid 7220-79-3
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钨酸* PNPG 7790-60-5
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