柱式凝固血液DNA提取试剂盒厂家直销

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名称：柱式凝固血液DNA提取试剂盒厂家直销
产地：国产|进口
规格：50次
英文名：Coagulated blood DNA column extraction kit
编号：BTN71204
本试剂盒是凝固血液DNA提取试剂盒(BTN71002)的升级产品，专门用于从新鲜或冻存的凝固全血(包括人和禽类)中提取基因组DNA。

产品特点：
1. DNA更加纯净，OD260/280在1.8-2.0之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 操作更加简单快捷，比凝固血液DNA提取试剂盒快十分钟以上。
3. 每克新鲜凝固全血DNA产量为20-50μg DNA。
4. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取1mL到10mL或15mL塑料离心管中并将离心管放置于65℃待用。
2. 称取凝固血液0.1-0.5 g，加入到预热的溶液A中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。
 注意：如果是干的血块，用量不要超过0.2g，但需将干血块剪成微小的碎片。
3. 将匀浆液置于65℃水浴保温5分钟，然后将不超过0.75mL的匀浆液上清转移到新的1.5mL离心管中。
 注意：尽量不要转移凝固血液碎片。
4.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀后冰浴5分钟。
5. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清液转移到新的1.5mL离心管中。
 注意：如果上清液呈红色，属于正常现象。
6. 加入0.2mL的自备*仿，震荡器上充分振荡30秒混匀。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物。将不超过0.6mL的上清液小心转移到新的1.5mL离心管中。
8. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀后分两次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要12000～15000g离心半分钟并弃穿透液。
9.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟。
10.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤，一般可以省略)。
11. 12000～15000g离心半分钟以去除残留通用洗柱液。注意：此步不能省略，否则残留的通用洗柱液会影响DNA的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入100μL 通用洗脱液，12000～15000g离心半分钟，管底溶液即DNA溶液，可立即使用或放冰箱长期保存。

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·限制性内切酶SphI
编号：BTN17-0260
英文名称：Sph I Restriction Endonuclease
规格：500U
Sph I限制性内切酶识别位点：
5´...G　C A T G↓C...3´
3´...C↑G T A C　G...5´

产品组成：

成分	规格
SphI，10U/μL	50μL
Buffer A，10×	1mL
Buffer B，10×	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

贮存Buffer：10mM potassiu*(代"m")-phosphate(pH7.0＠25℃)，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.15% Triton X-100，0.5mg/mL BSA and 50% glycerol。
1×Buffer A：10mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，0.1mg/mL BSA。
1×Buffer B：33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassiu*(代"m") acetate，0.1mg/ml BSA。

活性定义：一个活性单位是指50μl反应体系中，37℃条件下，1小时内将1μg的lambda DNA完全分解所需的酶量。

热灭活：65℃下孵育20分钟可灭活。

使用方法：
1．单酶切DNA：
①在离心管中加入下列溶液：

成分	用量
Sph I	0.5-2μL
10×Buffer A	2μL
DNA(0.5-1μg/μL)	1μL
nuclease-free water	16L

②轻柔混匀，短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
2．双酶切或多酶切DNA：
需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液(一般Buffer B可作为双酶切Buffer)，然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3．直接酶切PCR产品：
①在离心管中加入下列溶液：

成分	用量
PCR reaction mixture	10μL(~0.1-0.5μg of DNA)
nuclease-free water	18μL
10×Buffer A	2μL
Sph I	1-2μL

②轻柔混匀，短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。


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