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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
RNA Long-term Preservative Solution
- 库存:
775
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京RNA长效保存液价格厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多RNA长效保存液等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:北京RNA长效保存液价格厂家
品牌:百奥莱博
编号:BTN3100
英文名:RNA Long-term Preservative Solution
规格:1.5mL
本品是一种能高效抑制RNase活性的新型小分子混合物,用于防止RNase对RNA的降解作用。
产品特点:
1.高效抑制 RNase,保存在 RNA保存液中的RNA可以在抵抗100 ng/mL的RNase A的降解作用达 36小时,效果比人胎盘RNase抑制蛋白和RVC更有效。
2. 耐高温,100℃保温30分钟后活性不受任何影响。
3. 抗氧化,不需要DTT。
4. 有效pH范围广。
5.产品为淡红色液体,可以-20℃保存两年。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| RNA保存液 | 1.5ml |
| LiCl溶液(10M) | 1.5ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:4℃运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
将本产品直接用于溶解 RNA沉淀(跟使用 RNase-free 水一样),然后 放置在适当温度下保存(一般在-20℃)。保存在 RNApreserve中的RNA可以直接电泳,不影响Northern杂交。但由于RNA保存液会抑制后续酶反应,所以如果RNA要用于RT-PCR等反应,需要预先用 LiCl沉淀去除RNA保存液(将1/3倍体积的LiCl加入溶液中,4℃12000~15000g离心20-30分钟,弃上清,用75%乙醇洗一次既得RNA沉淀)。
疑难解答:
Q:本产品抑制 RNase的Ki值是多少?
A:本产品是混合物,不能确定其Ki值。
Q:百奥莱博的液相RNase清除剂和RNA保存液都可以保存 RNA,都能灭活/抑制溶液中 2 ng/μL左右的RNase,它们的主要区别何在?
A:一是原理不同。前者通过共价修饰使 RNase 失活(类似于DEPC);后者通过竞争抑制保护 RNA(类似于RNase Inhibitor)。二是兼容性不同。前者与很多后续反应兼容,故 RNA可以直接使用;后者会抑制很多后续反应,需要去除后在使用 RNA。三是稳定性不同。后者比前者更稳定,更耐热。
我公司的北京RNA长效保存液价格厂家,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·核酸稀释液,测OD专用
编号:BTN131179
英文名称:Diluent for NA OD Detection
规格:250mL
测定核酸的OD需要一定的pH和盐浓度,本产品就是根据这一特点开发的、专门用于溶解和稀释核酸样品的溶液。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
·DNA探针变性液
编号:BTN131208
英文名称:DNA Probe Denaturation Solution
规格:10mL
杂交反应进行时,探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链DNA探针进行杂交(包括检测RNA时),双链DNA探针在杂交前必须进行变性。本产品就是即用型的DNA探针变性液,专门针对DNA探针在杂交前进行变性处理。
产品特点:
1. 即开即用。
2. 使用方便快捷,可用于核酸杂交。
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
使用方法:
一、根据探针和靶分子的不同,分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对 DNA-DNA杂交,其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明:L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是超级杂交液中Na+的浓度,为0.75 M,16.6×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对 DNA-RNA杂交,其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对 RNA-RNA杂交,其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对 Oligo探针杂交,Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。
二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃,一般选择68℃。
2. 对 RNA-RNA或DNA-RNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。
如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃),则RNA 容易降解,所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(超级杂交液B型),以便能在42℃完成杂交。
3. 对 Oligo探针的杂交,最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短,更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等),所以最佳温度需要适度摸索和优化。
三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液,在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃,一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。
四、预杂交步骤
预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口,再剪掉一角,留一个小口),按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保温1-2小时,延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是:根据探针浓度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积,取出所需体积的探针到一干净的硅化的塑料离心管中,加入等体积的本产品,吹打混匀后室温放置5分钟变性后,将探针样品放入冰浴中冷却,加入0.05倍体积的自备的1 M的Tris-Cl溶液(pH7.2)以及等体积的自备的0.4 M的HCl溶液。
将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链DNA或RNA探针,则不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定,一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为6-12小时。
六、洗膜步骤。
注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹膜干燥。此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低,热稳定性较差,在一定的温度和较低的离子强度下,即可洗掉。
1.杂交完毕,取出塑料袋,剪去一角,倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋,用镊子取出印迹膜,浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中,室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中,在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针,则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上,吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。
北京RNA长效保存液价格厂家关键词:BTN3100,RNA Long-term Preservative Solution,RNA长效保存液
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