96孔板病毒RNA提取试剂盒(离心法)哪里卖

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

96孔板病毒RNA提取试剂盒(离心法)哪里卖的品牌：百奥莱博，是优质的RNA纯化产品，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多96孔板病毒RNA提取试剂盒(离心法)等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：96孔板病毒RNA提取试剂盒(离心法)哪里卖
编号：BTN80922
规格：1次|5次
英文名：Virus RNA extraction kit with 96-well plate(Centrifugal method)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博

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·SP6体外转录试剂盒
编号：BTN91107
英文名称：SP6 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。


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·尿嘧啶切刻酶
编号：BTN130666
英文名称：Uracile Nicking Enzyme
规格：50U
本产品在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口，它是尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)和DNA糖基化酶-裂解酶 Endo Ⅷ的混合物。UDG催化尿嘧啶碱基的切割，形成一个脱碱基(脱嘧啶)位点，但保持磷酸二酯骨架结构完整。Endo Ⅷ的裂解酶活力使脱碱基位点 3´和5´端的磷酸二酯键断裂，释放无碱基的脱氧核糖。其反应示意图如下：


产品特点：
1．PCR产物的克隆；
2．在DNA的尿嘧啶处产生缺口。

产品组成：

成份	规格
尿嘧啶切刻酶(1000U/mL)	50μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl反应体系中，37℃条件下，15分钟使10pmol的含有单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链产生切刻所需要的酶量。

·生物素化蛋白L
编号：BTN131101
英文名称：Biotin-Protein L
规格：0.5mg
本产品为生物素标记的蛋白L，可以结合含有特别kappa轻链的所有种类的IgG(IgG,IgM,IgA,IgE和IgD)，与kappa轻链结合而不干扰抗原的结合。其还可以结合单链抗体可变区基因片段(ScFv)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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·脱脂奶粉
编号：BTN130907
英文名称：Non-fat Milk
规格：50g
本产品为分子生物学级脱脂奶粉，可广泛用于Southern、Northern和Western印迹杂交实验的封闭试验。

储存条件：常温运输和保存、有效期半年。

·PreScissiom蛋白酶
编号：BTN130876
英文名称：PreScissiom Protease
规格：100U
PreScission蛋白酶是一种由人鼻病毒14型的3C蛋白酶和谷胱甘肽S-转移酶(GST)组成的融合蛋白。这种蛋白酶特异识别短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln/Gly-Pro中的Gln和Gly残基而进行切割，底物的识别和切割不仅依赖于融合蛋白的一级结构还依赖于融合蛋白的二级和三级结构。它可以特异性的将pGEX-6P系列等载体表达出的带有酶底物识别多肽序列融合蛋白的GST标签进行分离。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在5℃条件下反应16小时，能够切割100μg的GST标签的融合蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。

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