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上海禾午生物科技有限公司
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无
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2×500ml
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文献和实验再进行位点专一重组转入表达载体。Qiagen是一个载体通杀,给它加上大肠杆菌、杆装病毒和哺乳动物的启动子,这么看来Qiagen好像是最方便的,但是原核和真核的RNA聚合酶识别序列毕竟是不同的,对其表达的效率存在一定质疑。Promega的多系统表达有个突出的地方是它不单有普通原核表达、融合原核表达、哺乳动物表达,它还有体外表达。从哺乳动物细胞中提取的或通过克隆化DNA在体外转录产生的mRNA,在无细胞提取液中能被翻译而合成蛋白质,这些蛋白质可用于免疫沉淀实验或进行生物活性测定。一般用来进行体外
-20℃冷冻保藏,待测。 1.4 仪器 高效液相色谱(HPLC)仪:SIB810型泵、SP8450型UV检测器;反相C-18柱;微量进样器(25μl) (美国光谱物理公司);YQ-3型电动匀浆机(江苏江阴科研器械厂);LD4-2A离心机:4500r/min(北京医用离心机厂);旋涡混合器:WH361型(江苏太仓鹿河生化仪器厂)。 1.5 试剂 所用甲醇为重蒸过滤甲醇;水为重蒸馏水。乙腈 (色谱纯);甲醇,乙酸铵,柠檬酸,依地酸二钠 (分析纯);磷酸氢二钠,磷酸氢二铵
-100除去了部分杂蛋白,但接着再用阳离子交换柱SP分离(20mM PB ph=7.00),发现目的蛋白根本挂不上.我想试用硫酸铵分级沉淀除去部分杂蛋白,再过s-100.但不知硫酸铵分级沉淀该如何具体操作? 你可以先把缓冲液pH调到6试试能不能挂柱,此外其实你的蛋白分子量很小,杂质应该大多分子量比它大,你直接过sephadex G50那么大于30kd的很快就出来,或者上superdex 30 大于10KD的先出来,而你要的在后面,然后你再用离子交换试试,S-100分离范围比较宽,去杂质没有前面说
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