pMyc-TA-luc (报告基因质粒)

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pp53-TA-luc (报告基因质粒)是三抒生物自行研发的用于检测p53转录活性水平的报告基因质粒。pp53-TA-luc是以三抒生物的pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个p53结合位点，可以高灵敏度地检测p53的激活水平。
      pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
      萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
      pp53-TA-luc质粒的主要信息如下：

Base pairs	5659
p53 response element	20-73
Minimal TA promoter (pTA)	96-118
luc2 reporter gene	160-1812
SV40 late poly(A) signal	1847-2068
SV40 early enhancer/promoter	2116-2534
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region	2559-3353
Synthetic poly(A) signal	3378-3426
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3493-3512
ColE1-derived plasmid replication origin	3750
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4541-5401
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5506-5659
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5608-5627

 

pp53-TA-luc的多克隆位点及p53 response element的详细图谱如下：

	BglI KpnI p53 response element
1	GGCCTAACTG	GCCGGTACC A	CGTTTGCCTT	GCCTGGACTT	GCCTGGCCTT
	CCGGATTGAC	CGGCCATGG T	GCAAACGGAA	CGGACCTGAA	CGGACCGGAA
	BglII HindIII
51	GCCTTGGACA	TGCCCGGGCT	GTC AGATCTG	CAGAAGCTTA	GACAC TAGAG
	CGGAACCTGT	ACGGGCCCGA	CAG TCTAGAC	GTCTTCGAAT	CTGTG ATCTC
	Minimal TA promoter
101	GGTATATAAT	GGAAGCTC GA	CTTCCAGCTT	GGCAATCCGG	TACTGTTGGT
	CCATATATTA	CCTTCGAG CT	GAAGGTCGAA	CCGTTAGGCC	ATGACAACCA

      pp53-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pp53-TA-luc)包括：

Aat II	Afl II	Asc I	Ase I	Bsa I	BsaA I	BsiW I	BspM II
BssH II	Eco72 I	EcoR I	EcoR V	Mlu I	Nde I	Nhe I	Nru I
PaeR7 I	PflM I	Pme I	Pml I	Psp1406 I	Rsr II	Sac I	SnaB I
Spl I	Tth111 I	Vsp I	Xcm I	Xho I	Xmn I

      pp53-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pp53-TA-luc once)包括：

Sfi I	GGCCN,NNN`NGGCC	9		EcoN I	CCTNN`N,NNAGG	3034
Bgl I	GCCN,NNN`NGGC	9		BsiC I	TT`CG,AA	3429
Acc65 I	G`GTAC,C	15		BstB I	TT`CG,AA	3429
Asp718	G`GTAC,C	15		Sal I	G`TCGA,C	3443
Kpn I	G,GTAC`C	19		Afl III	A`CRYG,T	3693
PspA I	C`CCGG,G	64		ApaL I	G`TGCA,C	4007
Xma I	C`CCGG,G	64		HgiE II	ACCNNNNNNGGT -1/13	4272
Srf I	GCCC|GGGC	66		Not I	GC`GGCC,GC	4513
Sma I	CCC|GGG	66		BstX I	CCAN,NNNN`NTGG	4537
Bgl II	A`GATC,T	75		BstE II	G`GTNAC,C	4540
Hind III	A`AGCT,T	85		Ahd I	GACNN,N`NNGTC	4615
BsrG I	T`GTAC,A	651		Bsu36 I	CC`TNA,GG	4971
Dra III	CAC,NNN`GTG	1307		Pvu I	CG,AT`CG	4985
Gsu I	CTGGAG 21/19	1540		Sac II	CC,GC`GG	5009
Bpm I	CTGGAG 22/20	1541		Bst1107 I	GTA|TAC	5125
Apo I	R`AATT,Y	1923		Xca I	GTA|TAC	5125
Mun I	C`AATT,G	1987		Spe I	A`CTAG,T	5444
BamH I	G`GATC,C	2080		BsmA I	GTCTC`/9	5456
Stu I	AGG|CCT	2513		BsmB I	CGTCTC 7/11	5457

      pp53-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
      RVprimer3 (5608-5627):
      CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

保存条件：
      报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效，-20℃保存至少一年有效。β-半乳糖苷酶检测试剂-20℃避光保存至少6个月有效，-80℃避光保存至少一年有效。β-半乳糖苷酶反应终止液可以室温保存，也可以4℃或-20℃保存。
注意事项：
      最佳测定波长为420nm。在410-430nm范围内测定，具有相近的灵敏度。
      本检测试剂盒和Promega荧光素酶报告基因的裂解液兼容。用Promega荧光素酶报告基因裂解液裂解的样品可以用本试剂盒测定。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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