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见说明书
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蛋白电泳
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询问
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上海三抒生物科技有限公司
- 规格:
2ml
上海三抒生物科技有限公司是一家从事于生物化学行业 的企业,公司致力于为实验室分析领域提供一站式服务,为用户提供专业、快捷、可靠的全方位服务。
公司拥有一支高素质管理团队和一批经验丰富的技术检测研发团队,硕士以上学历约占70%,目前已与国内各大科研院校、高效、医院、化工食品领域等实验室以及企业建立了长期良好的合作关系。
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上海三抒生物科技有限公司将一直致力于生物、化学、医药、精细化工、食品工业、现代农业、地质矿产、生命科学、环境保护、疾病控制、新能源等领域的长远发展,一如既往地秉承“专业的”服务精神,“真诚的”服务理念和“客户至上”的服务宗旨,更好地服务于全体用户,为用户提供性价比最高的产品和最专业的技术服务!
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文献和实验免疫印迹法(immunobiotting test,IBT)
,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。更方便的方法是选用成套的裂解液和定量试剂盒测定蛋白质。如果浓度过高,可按比例稀释,读出蛋白浓度后,再折算回原样品浓度。 3. 电泳(Electrophoresis) 配制SDS-PAGE凝胶,在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS
器上)2 小时。3. 4 ℃ 下在微型离心机中以 16000 × g 离心 20 分钟。轻轻地从离心机中取出离心管,置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中。弃去沉淀。二、样品制备1. 取出小部分 (50 μL) 裂解物,用于蛋白分析。确定每种细胞裂解物的蛋白浓度。2. 向剩余体积的细胞裂解物中加入等体积的 2× Laemmli 样品缓冲液。我们推荐采用以下方法来还原样品和使样品变性,除非在线抗体数据表指明应使用非还原和非变性条件。3. 还原和变性:在 100 ℃ 下将样品缓冲液中的每种细胞裂解物煮沸
糖,建议进行 Pre-clear;如果使用磁珠,此步可忽略 抗 X 抗体的轻链(25 kD)和重链(50 kD) 更侧重于如何在实验上进行优化(见下文) *注意:总蛋白上样量过多也会造成 非特异性结合,建议上样量为 500 ug-1 mg。上样之前一定要先用 BCA 定个量!定个量!定个量! pre-clear:上样前先用裂解液过一遍柱子,减少基质本身对蛋白的吸附 Output:在某些 co-IP 实验中,实验人员会把IP后的上清分别进行诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的 WB 检测
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