SABC免疫组化试剂盒(小鼠/兔IgG)(DAB显色)北京厂

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名称：SABC免疫组化试剂盒(小鼠/兔IgG)(DAB显色)北京厂家现货
规格：100T-200T
品牌：百奥莱博
编号：QN1223
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG的免疫组化实验，DAB显色。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10ml
3% H2O2-—————————————10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液—————200ul
SABC-POD浓缩液——————————100ul
稀释液——————————————30ml
20×DAB显色液A——————————1ml
20×DAB显色液B——————————1ml

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片为例)
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2. 3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3. 可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸*缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6. 根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1ml稀释液加入10-20ul Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液,20-37℃ 孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
7. 根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
8. DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

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·β-环糊精
编号：QN0196
英文名称：β-Cyclodextrin
规格：250g
CAS号：7585-39-9
分子式：C42H70O35
分子量：1134.98
储存条件：室温干燥保存
性状：白色粉状结晶
溶解性：溶于NH4OH，参考浓度为50 mg/ml。

·辣根过氧化物酶
编号：QN0385
英文名称：Peroxidase(POD)
规格：10mg
HRP(辣根过氧化物酶)之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶，主要是因为其一方面易于提取，价格相对低廉;另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。

根据HRP的催化特性，ELISA中一般使用过氧化*(H2O2)作为HRP底物之一，在供*体(即色原底物)存在时，HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4可见，HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I，而复合物I又可与*供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物，当H2O2过量，由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成，酶活性受抑制(以后补上)。30％的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物，也为其抑制剂，因而ELISA要想得到满意的测定结果，H2O2必须限定在一定的浓度范围内，终浓度通常为2～6 mmol/L。然而在实际研究工作中，一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2～4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的抑制。如果30％H2O2贮存液浓度经测定证实确为30％，则稀释10 000—12 000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43.6，因此，可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。

固相ELISA中，当温度高于20oC时，HRP活性常较低，在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇-20或TritonX-100可延迟HRP的失活，且可使反应温度加大，但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依*供体的不同而有差异。如以2,2’-联氮-双-[3-乙基*并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)为*供体，则只能保护20％的酶活性，而以邻联茴香胺(ODA)为*供体时，酶活性的保护提高至90％。

储存条件：2～8℃


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