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细胞名称:NCI-H1666 人肺支气管癌细胞
组织来源:肺
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS
形 态:贴壁;上皮细胞样
PubMed=4736620; DOI=10.1111/j.1469-1809.1973.tb00588.x
Povey S., Gardiner S.E., Watson B., Mowbray S., Harris H., Arthur E., Steel C.M., Blenkinsop C., Evans H.J.
Genetic studies on human lymphoblastoid lines: isozyme analysis on cell lines from forty-one different individuals and on mutants produced following exposure to a chemical mutagen.
Ann. Hum. Genet. 36:247-266(1973)
PubMed=7316467; DOI=10.1111/j.1469-1809.1980.tb00953.x
Povey S., Jeremiah S., Arthur E., Steel M., Klein G.
Differences in genetic stability between human cell lines from patients with and without lymphoreticular malignancy.
Ann. Hum. Genet. 44:119-133(1980)
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littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库,但我不是这个方面科班出身,好多地方还不是很明白,想请教师兄师姐的经验,应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗?非常感谢!! neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵 littleyan0418
都是贴壁细胞,在消化传代过程中,步骤如下:倒尽旧的培养液->用无血清的培养基清洗一两次->加入一定量的胰酶,置于37度培养箱中5--10分钟,使细胞悬浮->显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->加入一定量的含血清的新培养液,以终止胰酶作用->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->吸出一部分加入新的培养瓶中->最后再补充加入一定量新的培养液。注意: 1、吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长的多。2、吸出细胞前要混匀,可以剧烈震荡培养瓶。3、我们用的是DMEM
(pH=7.4)清洗若干次至无明显血细胞; 2. 剪取肺组织边缘微血管丰富的组织,用含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗两次; 3. 将剪取的肺边缘组织剪成2-3mm3 大小,加入含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗; 4. 用进行过灭菌处理的玻璃滴管将剪碎的组织块和清洗用的1×PBS(pH=7.4)一起转入15ml离心管中; 5. 250rpm/min离心2 min,小心倾去液体,再加入适量的含双抗的1×PBS(pH=7.4),用玻璃滴管吹吸液体以清洗组织块; 6. 继续
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