- ¥2300
- TB Healthcare
- 佛山
- TBK5020001302
- 2025年07月16日
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- 技术资料
- 供应商：
广东体必康生物科技有限公司
- 检测方法：
ELISPOT法
- 适应物种：
人
- 样本：
血清、血浆、细胞培养上清等
- 规格：
96T/盒
本试剂仅供科研使用，不适合用于临床检测。用于测定特定细胞样本中（例如PBMCs）分泌IFN-γ的细胞比例，从而测定细胞对于特定抗原的免疫响应。
【IFN-γ简介】
20世纪30年代，许多病毒学家在研究两种病毒感染同一宿主细胞时，发现普遍存在两种病毒相互拮抗的现象，由此产生了病毒间干扰现象的概念。1957年发现细胞与病毒一起培养后能产生一种可溶性因子，该因子能“干扰”病毒感染新的细胞，此因子被称为“干扰素”。此后证明干扰素（interferon，IFN）是由一族分泌蛋白质组成，对同种病毒具有广谱抗病毒活性，它存在于各种脊椎动物体内，平时细胞内含量很低，经病毒或其它干扰素诱导剂诱导后产量可以提高。IFN蛋白家族基于它们的基因序列、染色体定位和受体特异性分为3型，即I型、II型和III型干扰素。其中，III型干扰素是一种新发现的细胞因子，与I型干扰素关系密切，称为IFN-γ。γ-干扰素主要是由抗原、有丝分裂素等刺激、活化的CD4+Th1、CD8+T细胞及NK细胞所分泌的一类可溶性糖蛋白。抗原、T细胞促分裂素（PHA、ConA）、细胞因子（IL -2、IL-12、IL-18、bFGF、PDGF、EGF）、葡萄球菌肠毒素B，均会诱导γ-干扰素的合成。
【检验原理】
机体被外来的病原感染后，会产生一系列的免疫应答反应，其中重要的一条免疫途径是细胞免疫。机体内的T细胞受到抗原的刺激致敏，产生效应T淋巴细胞，当这些T细胞再次受到相同抗原刺激时，会发生特异性免疫反应，分泌多种细胞因子如γ-干扰素。经适当分离、处理的细胞（如PBMCs）与相应刺激免疫原一起加入到预包被抗γ-干扰素抗体的PVDF膜微孔中，培养一段时间。若细胞被激活开始分泌γ-干扰素，局部（在紧靠分泌细胞的周围）分泌出的γ-干扰素会被PVDF薄膜上特异抗体捕获。被捕获的γ-干扰素可进一步与辣根过氧化物酶偶联的抗γ-干扰素抗体特异性结合并使其滞留在PVDF薄膜表面，最后通过显色底物使其在反应部位形成不溶性斑点，每一个斑点代表一个分泌γ-干扰素的细胞，记数斑点数量可以获得被激活细胞的数量。并通过与总细胞数的比值，可以进一步计算在被激活细胞的频率。
【储存条件及有效期】
•试剂未启用于2~8℃：避光密封保存，有效期12个月。
•试剂启用后于2~8℃：有效期14天。
【性能】
1、精密度：斑点数≥100个时，批内差异≤15%，批间差异≤15%。
2、特异性：与人源IL-2、IL-18、IL-4、IL-21、IL-23、IFN-ω、IFN-α-2a、IFN-α-2b、TNF-α无明显交叉反应。
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文献和实验相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 试剂盒内容：PVDF96孔板，室温保存;0.1ml捕获抗体，4℃保存;0.1ml生物素标记检测抗体，4℃保存;15ul亲和素碱性磷酸酶标，4℃保存;0.25g牛血清白蛋白，4℃保存;0.25g脱脂乳，4℃保存;11ml底物缓冲液，4℃保存;11ml浓缩PBS (10X)，室温保存;11ml浓缩洗涤液(200x)，室温保存 自备材料/试剂： 细胞培养 液，CO2孵育箱，70%酒精
ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF)，这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细胞数，发现该方法敏感性高简便易行。后来，他们又用这种方法定量分析受到有丝分裂原刺激的外周血中分泌IFN2γ的细胞数。随后，用ELISPOT法在单细胞水平检测分泌其他细胞因子(如IL
ELISPOT与ELISA 、有限稀释法、四聚体法、Cr51释放法、胞内CK染色法比较
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