活性氧(ROS)检测试剂盒库存

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")活性氧(ROS)检测试剂盒库存，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：活性氧(ROS)检测试剂盒库存
产地：国产|进口
编号：SY0802
品牌：百奥莱博
规格：100～500T
英文名：Reactive Oxygen Species Assay Kit
本试剂盒采用了银染的方法，用于对聚丙*(代"烯")酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的微量蛋白质进行检测。生化实验中蛋白质通过凝胶电泳的方式分离后需经过染色才能肉眼可见，染色方法有两种：1）染料染色法；2）金属染色法。前者主要是考马斯亮蓝染色法，后者主要采用银染法。前者操比较简单，省时；但是后者具有较高的检测灵敏性，可检测到10-100 ng蛋白质，比考马斯亮蓝染色法灵敏100多倍。

产品组份：
显影底物液（10×）————1×100ml
敏化底物液（5×）————3×90ml
银溶液（10×）—————1×20ml
溶液I（5×）——————1×16ml
溶液II—————————1×10ml
溶液III————————1×2ml
终止液（10×）—————2×100ml

使用方法
以10cm2凝胶为例，不同凝胶大小可按比例调整增敏液、显色液和终止液的体积。
所有浓缩液使用前用去离子水稀释至1×工作液，水平摇床的转速设置在55rpm左右。
1）固定：按体积比，冰醋酸：无水乙醇：去离子水=1：4：5配制100ml固定液，将电泳后的凝胶放入固定液中，室温条件置于水平摇床上，缓慢震荡固定120min；
2）增敏：用去离子水分别稀释5×敏化底物液，以及5×溶液I至1×工作液。取65.5ml 1×敏化底物液加入4ml 1×溶液I、500μl 溶液II、30ml 无水乙醇混匀即得到增敏液。然后将凝胶放入100ml增敏液中，室温条件置于摇床上摇动60min；
3）洗涤：用去离子水漂洗30min，期间更换3~5次。
4）银染：用去离子水稀释10×银溶液至1×工作液。取10ml 1×银溶液加入40μl 溶液III，加入去离子水补足体积至100ml即得到银染液。然后将凝胶放入100ml银染液中，室温条件置于摇床上摇动60min；
5）洗涤：用去离子水漂洗银染后的凝胶4次，每次1min；
6）显色：用去离子水稀释10×显影底物液至1×工作液。取40ml 1×显影底物液加入40μl 溶液III、3μl 1×溶液I，加入去离子水补足体积至100ml即得到显色液。然后将凝胶放入100ml显色液中，室温条件置于摇床上摇动6min。【注意】：显色 的时间可控制在1-15min，直至出现比较理想的预期蛋白条带。
7）终止：用去离子水稀释10×终止液至1×终止液。取100ml 1×终止液，将显色后的凝胶放入其中，室温条件置于摇床上摇动，反应40min；
8）洗涤：用100ml去离子水洗30min，期间更换2次。
9）照相：保存显色出的蛋白质条带并记录。

注意事项
1）显色过程较快，要注意把握时间，避免染色过度。
2）所用器皿要很洁净，不要用手直接接触，以免杂蛋白污染。
3）清洗用水尽量用高纯度去离子水如ddH2O，可以减少背景着色。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：4℃，有效期一年。

关于活性氧(ROS)检测试剂盒库存的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·通用型Western Blot电泳电转缓冲液
编号：SY0360
英文名称：Universal Electrophoresis and Transfer Buffer (for Western Blot)
规格：1L
Western blot实验首先需要进行电泳分离目的蛋白，然后将分开的蛋白从凝胶转移到固相基质如硝化纤维素膜或PVDF膜上，从而进行随后的免疫印迹检测。Tris-甘*酸是最通用的电泳和转膜缓冲液配方，本品是改进的缓冲液配方，以干粉的形式提供，使用时只需要用去离子水溶解即可。

使用方法：将本品溶解于1 L去离子水中，混匀，即形成1×电泳缓冲液；取800 ml的1×电泳缓冲液加入200 ml乙醇即得到湿转及半干通用电转缓冲液。

注意事项
不建议反复使用或长期放置缓冲液，否则会降低电泳及转膜效果。
储存条件：室温密封

·天然腔肠荧光素
编号：SY0234
英文名称：Coelenterazine Native
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的天然腔肠素（Coelenterazine native），是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，也是水母发光蛋白的辅助因子，应用非常广泛，可用于检测活细胞中*离子浓度，基因报告分析，BRET（生物发光共振能量转移）研究，ELISA，HTS，以及组织或细胞中ROS水平的化学发光检测。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物（见附录1，腔肠素及其衍生物的特性）。

中文别名：天然腔肠素；腔肠素游离酸
英文别名：3,2-Dihydro-2-(p-hydroxybenzyl)-6-(p-hydroxyphenyl)-8-benzylimidazolo[1,2-a] pyrazin-3-one CLZN; Renilla luciferin; Coelenterazine free base
CAS：55779-48-1
分子式：C26H21N3O3
分子量：423.46 g/mol
外观：棕黄色粉末
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
纯度：＞95%（TLC）
结构：


注意事项
1) 腔肠素粉末或者储存液最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-80℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·Tis-EDTA抗原修复液(50×)
编号：SY0775
英文名称：Antigen Retrieval Buffer (50×Tris-EDTA, pH 9.0)
规格：100ml
免疫染色实验，细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于：1）醛类固定剂导致组织上的许多*基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigen retrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。

抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到最佳的修复效果。

本品为Tris-EDTA抗原修复液，pH 9.0，适合用于经甲醛固定的石蜡切片的抗原修复。本品为50×的浓缩液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。

储存条件：常温。


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纤维素酶(绿色木霉) Sodium malonate monohydrate 9012-54-8
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1,8-二氮杂-9-芴酮 Heparin lithiu*(代"m") 54078-29-4

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