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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 注册证号:
详见说明书
- 保存条件:
在-20℃或-80℃可长期保存
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
镍柱介质2mL说明书
- 库存:
33
- 供应商:
上海一研
镍柱介质2mL说明书注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
镍柱介质2mL说明书实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提两次,氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
镍柱介质2mL说明书实验步骤:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
镍柱介质2mL说明书特点
1.离心柱法;
2.快速:30min内即可完成全部操作;
3.得率高:无需裂解红细胞,直接从全血中提取DNA,可从0.2 mL健康人类全血中提取得到不低于3μg DNA;
4.操作简便:无需水浴,全部提取操作可在室温下进行;
5.高质量:所提取的DNA纯度高、得率高,可直接用于PCR、酶切、杂交等下游实验。
镍柱介质2mL说明书客户提供
●新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
●详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供
基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证
高纯度RNA/DNA、完整货期
3-5个工作日
ET0016 (1 mg) N-(4-butyl-2-methylphenyl)-N’-hydroxy-methanimidamide; N-hydroxy-N’-(4-n-butyl-2-methylphenyl)Formamidine; HET0016
CDDO (10 mg) 2-cyano-3,12-dioxo-oleana-1,9(11)-dien-28-oic acid; Bardoxolone|RTA 401; CDDO
S-Nitroso-L-glutathione (50 mg) N-(N-L-。gamma。-glutamyl-S-nitroso-L-cysteinyl)-glycine; GSNO; S-Nitroso-L-glutathione
7(Z)-Tricosene (5 mg) 7Z-tricosene; 7(Z)-Tricosene
Palmitoyl Ethanolamide-d5 (100 ug) N-(2-hydroxyethyl)-hexadecanamide-15,15,16,16,16-d5; Palmidrol-d5|PEA-15,15,16,16,16-d5; Palmitoyl Ethanolamide-d5
JWH 018 4-hydroxyindole metabolite (10 mg) (4-hydroxy-1-pentyl-1H-indol-3-yl)(naphthalen-1-yl)-methanone; JWH 018 4-hydroxyindole metabolite
JWH 251 3-methylphenyl isomer (10 mg) 1-(1-pentyl-1H-indol-3-yl)-2-(m-tolyl)ethanone; JWH 251 3-methyl isomer; JWH 251 3-methylphenyl isomer
JWH 081 8-methoxynaphthyl isomer (5 mg) (8-methoxynaphthalen-1-yl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl)methanone; JWH 081 8-methoxynaphthyl isomer
JWH 180 (10 mg) (1-propyl-1H-indol-3-yl)(4-propyl-1-naphthalenyl)-methanone; JWH 180
Linoelaidic Acid (1 g) 9E,12E-octadecadienoic acid; Linoelaidic Acid
13-Docosenamide (100 mg) 13Z-docosenamide; Armoslip E|Erucamide|cis-13-Docosenamide; 13-Docosenamide
JNJ-5207852 (5 mg) 1-[3-[4-(1-peridinylmethyl)phenoxy]propyl]-peridine; JNJ-5207852
Ku-0063794 (5 mg) rel-5-[2-[(2R,6S)-2,6-dimethyl-4-morpholinyl]-4-(4-morpholinyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-yl]-2-methoxy-benzenemethanol; Ku-0063794
IWP-2-V2 (1 mg) N-(6-methyl-2-benzothiazolyl)-2-[[3,4,6,7-tetrahydro-4-oxo-3-(phenylmethyl)thieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl]thio]-acetamide; Inhibitor of Wnt Production-2-V2; IWP-2-V2
PB-22 (25 mg) 1-pentyl-8-quinolinyl ester-1H-indole-3-carboxylic acid; QUPIC; PB-22
Amlexanox (5 mg) 2-amino-7-(1-methylethyl)5-oxo-5H-[1]benzopyrano[2,3-b]pyridine-3-carboxylic acid; Aphthasol
MDL 28170 (25 mg) N-[(1S)-1-[[(1-formyl-2-phenylethyl)amino]carbonyl]-2-methylpropyl]-carbamic acid, phenylmethyl ester; Calpain Inhibitor III; MDL 28170植物杆菌 Lactobacillus plantarum鸡油菌 Cantharellus cibarius
斯氏假单胞菌 Pseudomonas stutzeri小鼠外周血白细胞完全培养基
大鼠虹膜色素上皮细胞完全培养基人膀胱成纤维细胞完全培养基
铅色青霉 Penicillium lividum葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum
黑曲霉 Aspergillus niger大肠杆菌 Escherichia coli
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum293E(人胚肾细胞(EBNA1基因修饰))
RWPE1(人前列腺上皮细胞)串珠菌 Leuconostoc lactis
镍柱介质2mL说明书杆菌属 Lactobacillus sp.豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum
根瘤菌MDA-MB-231, 人腺细胞
U14(小鼠子宫颈细胞)酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
日本曲霉 Aspergillus japonicus5637, 人膀胱细胞
燕麦镰孢屎肠球菌 Enterococcus faecium
枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis香菇 Lentinula edodes
HEC-1-A(人子宫内膜腺细胞)CNE-2Z(人鼻咽细胞)
酸球菌 Lactococcus lactis酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
苜蓿中华根瘤菌链霉菌 Streptomyces sp.
SF126(人脑瘤细胞)人胚肺成纤维细胞
戊糖杆菌 Lactobacillus pentosusrCF, 大鼠心脏成纤维细胞
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文献和实验检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素: 1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测 一、分析试验的应用类型 一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适
His-tag 时,常遇到的问题是寄主蛋白与填料的非特异性结合,在哺乳动物重组蛋白的纯化过程中,这样的情况更为明显。由于系统中有很多含有组氨酸(histidine)的残基的蛋白,这种蛋白结构与 his-tag 相似,容易与镍柱结合,因此导致目标蛋白纯度降低[13]。FLAG-tag 系统可在非变性条件下进行纯化,能得到高纯度、有活性的蛋白,但其缺点为纯化介质较为不稳定,且纯化成本高上许多[5]。另一常用的标签为 GST-tag,一个 26kDa 的蛋白,其特点是表达量高,具高度抗原性,常用来增加目标
问:最近在回收凝胶柱时(用的是镍柱),经过多次的洗脱液继续平衡清洗,发现还有一些很难去除的杂蛋白,不知应该用什么方法把这些难除的杂蛋白去除?答:一般用6M盐酸胍+0.2M AC和2%的SDS清洗一般的柱子都是相同过程,大致顺序如下1.6M盐酸胍+0.2M AC2.水3.2%SDS4.水5.乙醇梯度20%-100%-20%,可以任选阶梯型的梯度6.0.1M EDTA7.水7.CHARGE BUFFER9.水10.BINDING BUFFER可以选取其中一部分就行了,不需要每次都做完这个步骤
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