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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 注册证号:
详见说明书
- 保存条件:
在-20℃或-80℃可长期保存
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务
- 库存:
30
- 供应商:
上海一研
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提两次,氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务实验步骤:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务特点
1.离心柱法;
2.快速:30min内即可完成全部操作;
3.得率高:无需裂解红细胞,直接从全血中提取DNA,可从0.2 mL健康人类全血中提取得到不低于3μg DNA;
4.操作简便:无需水浴,全部提取操作可在室温下进行;
5.高质量:所提取的DNA纯度高、得率高,可直接用于PCR、酶切、杂交等下游实验。
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务客户提供
●新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
●详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供
基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证
高纯度RNA/DNA、完整货期
3-5个工作日
Alprenolol (hydrochloride) (250 mg) H 56/28; 1-[(1-methylethyl)amino]-3-[2-(2-propen-1-yl)phenoxy]-2-propanol, monohydrochloride
Lisdexamfetamine (hydrochloride) (exempt preparation) (1 mg) Lisdexamphetamine; (2S)-2,6-diamino-N-[(1S)-1-methyl-2-phenylethyl]-hexanamide, dihydrochloride
Boc-D-FMK (1 mg) BAF|Boc-Asp(OMe)-FMK|Boc-D(OMe)-FMK|Boc-D-Fluoromethylketone; 3S-[[(1,1-dimethylethoxy)carbonyl]amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanoic acid methyl ester
LY411575 (10 mg) N-[(1S)-2-[[(7S)-6,7-dihydro-5-methyl-6-oxo-5H-dibenz[b,d]azepin-7-yl]amino]-1-methyl-2-oxoethyl]-3,5-difluoro-αS-hydroxy-benzeneacetamide
BIX02188 (5 mg) (3Z)
GIT 27 (25 mg) VGX-1027; 4,
AB-CHMINACA metabolite M5A (5 mg) 1-((4-hydroxycyclohexyl)methyl)-1H-indazole-3-carboxylic acid
Promethazine (hydrochloride) (25 g) Diprazin|Fellozine|Lergigan|Phenergan|Romergan; N,N,α-trimethyl-10H-phenothiazine-10-ethanamine, monohydrochloride
MAB-CHMINACA (1 mg) ADB-CHMINACA; N-(1-amino-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)-1-(cyclohexylmethyl)-1H-indazole-3-carboxamide
CEP-33779 N-[3-(4-methyl-1-perazinyl)phenyl]-8-[4-(methylsulfonyl)phenyl]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-2-amine
Clinafloxacin (hydrochloride) (500 mg) AM1091; 7-(3-amino-1-pyrrolidinyl)-8-chloro-1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid
Docosahexaenoic Acid ethyl ester-d5 (1 mg) Cervonic Acid ethyl ester-d5|DHA ethyl ester-d5; 2,4,6,8,10,12-docosahexaenoic acid, ethyl ester-d5
Difenoxin (hydrochloride) (5 mg) Diphenoxylic Acid|R 15403; 1-(3-cyano-3,3-diphenylpropyl)-4-phenyl-4-peridinecarboxylic acid, monohydrochloride
EAM2201 RM (1 mg) JWH 210 N-(5-fluoropentyl) analog; (4-ethyl-1-naphthalenyl)[1-(5-fluoropentyl)-1H-indol-3-yl]-methanone
AZD 2461 4-[[4-fluoro-3-[(4-methoxy-1-peridinyl)carbonyl]phenyl]methyl]-1(2H)-Phthalazinone
生物素标记酰化组蛋白H3K9多肽 Biotinylated Acetyl Histone H3K9 Peptide (100 ul)
Z-DEVD-FMK, Caspase-3抑制剂(氟基酮) Z-DEVD-FMKLLC-WRC 256(大鼠腹水细胞)大鼠小脑颗粒细胞完全培养基
嗜热脂肪地芽孢杆菌 Geobacillus stearothermophilus酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
白黄侧耳 Pleurotus cornucopiae酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
小鼠肠上皮细胞完全培养基豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
人表皮黑色素细胞完全培养基HELF(人胚肺成纤维细胞)
戊糖杆菌 Lactobacillus pentosus植物杆菌 Lactobacillus plantarum
蜡状芽胞杆菌 Bacillus cereus根瘤菌 Rhizobium sp.
HET-1A, 人食管上皮细胞大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基
RIPA 裂解液 ( 中 )100mL售后服务台湾根霉 Rhizopus formosensis清酒酵母 Saccharomyces sake
不产色链霉菌 Streptomyces achromogenes黑曲霉 Aspergillus niger
人非小细胞肺细胞大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicumNCI-H1650
葡枝根霉 Rhizopus stoloniferOS-RC-2(人肾细胞)
贝叶多孔菌杆菌属 Lactobacillus sp.
蟾毒灵苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti20mg/支;98%
大鼠结肠平滑肌细胞完全培养基TE-11(人食管细胞)
异常汉逊酵母 Hansenula anomala酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
泾阳链霉菌 Streptomyces jingyangensis猴菌
NCI-H596(人肺腺鳞细胞)胶冻样芽胞杆菌 Bacillus mucilaginosus
肉桂色曲霉 Aspergillus cinnamomeusEAC(小鼠艾氏腹水细胞)
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文献和实验1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml (1%)Aprotinin
多篇 SCI 发现用 RIPA 提蛋白存在问题,我们该如何应对?
这篇综述重点说明使用 RIPA 裂解液提取总蛋白以及下游实验中可能存在的问题。RIPA 裂解液常用于从脊椎动物细胞和组织中提取总蛋白 [1]。但是由于蛋白质间有较大的差异和非蛋白成份的干扰,所以从一个样本中同时释放和溶解所有蛋白质是非常困难的。特别是一些整合到膜上的蛋白质,或与其他蛋白质 / 核酸形成复合物时,就大大阻碍了提取效率。因此可以推断,蛋白质在提取过程中或多或少的与在体内时真实情况不尽相同。经典 RIPA 裂解液中含有低浓度的十二烷基硫酸钠(SDS 变性剂),脱氧胆酸(干扰蛋白质间
-3, caspase-7, parp and GD1 检测➤ 主要发现p24, p20 存在于 RIPA 提取的蛋白中,但 Laemmli 裂解液提取的蛋白中却不存在。证明了 RIPA buffer 提取蛋白时会人工激活 caspase-3 and caspase-7。用 Laemmli 缓冲液加超声处理可进一步从 RIPA 不可溶性组分中提取出蛋白。例二.Kevin A. Janes,(2016).An Analysis of Critical Factors for Quantitative
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