A9细胞

A9细胞产品概述：

A9 小鼠皮下结缔组织细胞
细胞名称	A9（小鼠皮下结缔组织细胞）
种属	小鼠
年龄（性别）	雄；100日龄
组织来源	皮下结缔组织；疏松结缔组织和脂肪；正常
生长特性	贴壁
细胞形态	成纤维细胞样
背景描述	A9细胞是从野生型细胞株L中分离得到的。A9细胞对HAT选择培养基敏感，并缺失了腺苷转磷酸核糖基酶与次黄嘌呤转磷酸核糖基酶；A9细胞对8-氮鸟嘌呤(0.003mg/ml)和6-硫代鸟嘌呤(0.1mM)有抗性。
生长培养基	DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S
培养条件	气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

收到常温A9细胞后如何处理？
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
A9细胞传代操作步骤
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
温馨提醒：
1、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞首次传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。
2、确认细胞状态良好后，应及时将部分细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失，影响后续实验。
3、建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3张细胞照片，记录细胞状态，便于后续和技术支持沟通交流。
订购A9细胞事先需要准备什么？
客户应具有一定细胞培养知识与经验，并具备基本实验设备，如细胞培养实验室、无菌操作台、CO2培养箱，倒置显微镜等；还应准备好相应的无菌培养基、血清、双抗、细胞培养瓶、培养板等。
细胞发货标准是什么？规格、数量是多少：
细胞发货时，保证细胞处于生长对数期；贴壁细胞达到75%以上汇合度，约5×10^5cells/T25细胞培养瓶；传代次数5代以内；冻存细胞发2个冻存管；无微生物污染。
A9细胞发货形式：
细胞通常用T25细胞培养瓶培养，发货时用相应的完全培养基灌满细胞瓶，密封瓶口后放在包装盒内，以快递的方式发送给客户。天气变冷，最低温低于4℃时，以冻存细胞,干冰运输的方式发货。
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