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文献和实验动物血中超氧化物歧化酶的提取和活性测定 [原理] 超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,简称 SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。它作为生物体内重要的自由基清除剂,可以清除体内多余的超氧阴离子,在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子(0 2 - )是人体氧代谢产物,它在体内过量积累会引起炎症
的过氧化氢生成量[15](15) ; ;自由基的检测方法很多,目前主要有ESR,HPLC,化学发光法以及分光光度法,我看了一点文献,我困惑的是,我要测定细胞中的超氧阴离子和羟自由基,我想用荧光分光光度法或者化学发光法,可是我发现一些反应体系要在酸性条件下反应(比如有的里面就有硫酸)。这对于细胞应该有损伤啊~还有怎样处理细胞~希望对于自由基检测有经验的战友多多指导,也希望希望做自由基检测的新手一起交流.有国外文献提到,DCFH容易自氧化,不稳定,还有正象你文献所说一样,DCFH所反映的是线
一、原理 超氧物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)普遍存在于动、植物体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2,可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙,后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。二、材料
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