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- 2025年07月10日
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文献和实验蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。 1、仪器设备 超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、台式离心机、旋涡混悬器等。 2、实验试剂 选用美国Stratagene公司生产的支原体检测试剂盒（内有引物、阳性
miRNA定量 进行一次逆转录即可实现所有目标miRNA的测定？没错，采用加尾法，一次逆转录就可以得到全部miRNA对应的cDNA。 我们知道，真核生物mRNA都是有poly-A尾巴的，这样Oligo-dT（逆转录引物）就很容易结合到mRNA上来合成cDNA了。 miRNA就缺了poly-A尾巴，怎么办呢？在逆转录试剂盒中加入poly-A聚合酶，先给它们加上一串poly-A尾巴，然后用带有一段通用序列的Oligo-dT和逆转录酶来合成cDNA。这样一来，一次逆转
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