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- 2026年05月21日
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柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书
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54
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上海一研
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书注意事项：
1.从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。
2．匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3．分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书详细介绍：
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如： 真细菌孢子（eubacterial spores）、内芽孢（endospores）、格兰仕阳性菌（gram positive bacteria）、酵母（yeast）、线虫（nematodes）、海藻（algea）、真菌（fungi）等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸，并最大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法，可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品，附加额外的处理方法。
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。
Prostaglandin D3 （25 ug） PGD3； 9α,15S-dihydroxy-11-oxo-prosta-5Z,13E,17Z-trien-1-oic acid
ADB-FUBINACA （50 mg） N-[1-（aminocarbonyl）-2,2-dimethylpropyl]-1-[（4-fluorophenyl）methyl]-1H-indazole-3-carboxamide
W-15 （10 mg） 4-chloro-N-[1-（2-phenylethyl）-2-peridinylidene]-benzenesulfonamide
A-967079 （10 mg） （1E,3E）-1-（4-fluorophenyl）-2-methyl-1-penten-3-one oxime
JIB-04 （25 mg） JHDM Inhibitor VII|NSC 693627； （E,E）-2-（5-chloro-2-pyridinyl）hydrazone phenyl-2-pyridinyl-methanone
N-tert-butyl-α-Phenylnitrone （1 g） PBN； 2-methyl-N-（phenylmethylene）-2-propanamine N-oxide
BW 755C （100 mg） 4,5-dihydro-1-[3-（trifluoromethyl）phenyl]-1H-pyrazol-3-amine
Dobutamine （hydrochloride） （50 mg） Dobutrex|Inotrex|NSC 299583； 4-[2-[[3-（4-hydroxyphenyl）-1-methylpropyl]amino]ethyl]-1,2-benzenediol, monohydrochloride
AM2201 （exempt preparation） （1 mg） [1-（5-fluoropentyl）-1H-indol-3-yl]-1-naphthalenyl-methanone
Cyclobenzaprine （hydrochloride） （100 mg） Flexeril|Lisseril|MK 130； 3-（5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5-ylidene）-N,N-dimethyl-1-propanamine, monohydrochloride
25C-NBF （hydrochloride） （10 mg） 2；C-C-NBF； 4-chloro-N-[（2-fluorophenyl）methyl]-2,5-dimethoxy-benzeneethanamine, monohydrochloride
Naphyrone （hydrochloride） （exempt preparation） （1 mg） NRG-1|Naphpyrovalerone|O-2482|β-Naphyrone； 1-（2-naphthalenyl）-2-（1-pyrrolidinyl）-1-pentanone, monohydrochloride
5-Methylcytidine （250 mg） NSC 363933； 5-methyl-cytidine
Coelenterazine 400a （5 mg） DeepBlueC
trans-Urocanic Acid （1 g） 3-（1H-imidazol-5-yl）-2E-propenoic acid
TDZD-8 （5 mg） GSK3β Inhibitor I|NP 01139； 2-
Fluorescein-5-maleimide （5 mg） 1-（3’,6’-dihydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1（3H）,9’-[9H]xanthen]-5-yl）-1H-pyrrole-2,5-dione
MTSSL （50 mg） 2,5-dihydro-2,2,5,5-tetramethyl-3-[[（methylsulfonyl）thio]methyl]-1H-pyrrol-1-yloxy海洛克氏菌
0.1%蛋白胨水溶液200ml
头孢霉
白色噬琼胶菌
粗壮假丝酵母
宋内志贺菌冻干粉
串珠镰孢
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书善变副球菌
龟裂链霉菌
粪链球菌
西蒙氏柠檬酸盐琼脂斜面 30 支/盒
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae
木层孔菌
三宝垄根霉
岛青霉
英诺克李斯特氏菌德氏乳杆菌保加利亚亚种
嗜热链霉菌
韩国丛毛单胞菌
福氏志贺菌CMCC51572冻干粉南京便诊
葱头伯克氏菌
树状微杆菌
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
1.从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。
2．匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3．分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书详细介绍：
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如： 真细菌孢子（eubacterial spores）、内芽孢（endospores）、格兰仕阳性菌（gram positive bacteria）、酵母（yeast）、线虫（nematodes）、海藻（algea）、真菌（fungi）等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸，并最大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法，可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品，附加额外的处理方法。
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒50 次说明书操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。
Prostaglandin D3 （25 ug） PGD3； 9α,15S-dihydroxy-11-oxo-prosta-5Z,13E,17Z-trien-1-oic acid
ADB-FUBINACA （50 mg） N-[1-（aminocarbonyl）-2,2-dimethylpropyl]-1-[（4-fluorophenyl）methyl]-1H-indazole-3-carboxamide
W-15 （10 mg） 4-chloro-N-[1-（2-phenylethyl）-2-peridinylidene]-benzenesulfonamide
A-967079 （10 mg） （1E,3E）-1-（4-fluorophenyl）-2-methyl-1-penten-3-one oxime
JIB-04 （25 mg） JHDM Inhibitor VII|NSC 693627； （E,E）-2-（5-chloro-2-pyridinyl）hydrazone phenyl-2-pyridinyl-methanone
N-tert-butyl-α-Phenylnitrone （1 g） PBN； 2-methyl-N-（phenylmethylene）-2-propanamine N-oxide
BW 755C （100 mg） 4,5-dihydro-1-[3-（trifluoromethyl）phenyl]-1H-pyrazol-3-amine
Dobutamine （hydrochloride） （50 mg） Dobutrex|Inotrex|NSC 299583； 4-[2-[[3-（4-hydroxyphenyl）-1-methylpropyl]amino]ethyl]-1,2-benzenediol, monohydrochloride
AM2201 （exempt preparation） （1 mg） [1-（5-fluoropentyl）-1H-indol-3-yl]-1-naphthalenyl-methanone
Cyclobenzaprine （hydrochloride） （100 mg） Flexeril|Lisseril|MK 130； 3-（5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5-ylidene）-N,N-dimethyl-1-propanamine, monohydrochloride
25C-NBF （hydrochloride） （10 mg） 2；C-C-NBF； 4-chloro-N-[（2-fluorophenyl）methyl]-2,5-dimethoxy-benzeneethanamine, monohydrochloride
Naphyrone （hydrochloride） （exempt preparation） （1 mg） NRG-1|Naphpyrovalerone|O-2482|β-Naphyrone； 1-（2-naphthalenyl）-2-（1-pyrrolidinyl）-1-pentanone, monohydrochloride
5-Methylcytidine （250 mg） NSC 363933； 5-methyl-cytidine
Coelenterazine 400a （5 mg） DeepBlueC
trans-Urocanic Acid （1 g） 3-（1H-imidazol-5-yl）-2E-propenoic acid
TDZD-8 （5 mg） GSK3β Inhibitor I|NP 01139； 2-
Fluorescein-5-maleimide （5 mg） 1-（3’,6’-dihydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1（3H）,9’-[9H]xanthen]-5-yl）-1H-pyrrole-2,5-dione
MTSSL （50 mg） 2,5-dihydro-2,2,5,5-tetramethyl-3-[[（methylsulfonyl）thio]methyl]-1H-pyrrol-1-yloxy海洛克氏菌
0.1%蛋白胨水溶液200ml
头孢霉
白色噬琼胶菌
粗壮假丝酵母
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苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae
木层孔菌
三宝垄根霉
岛青霉
英诺克李斯特氏菌德氏乳杆菌保加利亚亚种
嗜热链霉菌
韩国丛毛单胞菌
福氏志贺菌CMCC51572冻干粉南京便诊
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1、RNA纯化系列产品
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4、探针标记及检测系列产品
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文献和实验相关实验
可以采取现在比较常用的TRIzol一步法。不要使用带柱子的RNA提取试剂盒，因为除了专门用于提取miRNA的试剂以外，绝大部分柱子无法捕获20nt左右的miRNA。 2、电泳 （1）配制15%的尿素变性PAGE胶，可以先用预冷的0.5XTBE缓冲液作为电泳缓冲液，60V预跑30min。 （2）将样品与RNA loading buffer按比例混合，70℃预热5min，立即放置冰上。 （3）上样前，用缓冲液冲洗点样孔，防止点样孔中的杂质影响电泳。 （4）点样时，使样品均匀铺在点样孔底部
操作篇：western blot 之 SDS－PAGE 电泳
板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固的过程中要经常在两边补胶。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。 注意：「浓缩胶凝固的过程中要经常在两边补胶」其实说经常有点过了，补 1～2 次就行了，不补胶问题也不大。 5. 用水冲洗一下浓缩胶，将其放入电泳槽中。 注意：冲洗的话个人感觉可以使用 5 ml 的针筒，当然操作不能太粗暴了。 6. 测完蛋白含量后，计算含
，按照Bio-Rad Mini Ⅱ/Ⅲ说明书提示装好玻璃板； ③ 按如下体积配制10％分离胶8.0 ml，混匀：ddH2O 3.0 ml；1.0 mol/LTris-HCl pH=8.8 2.1 ml；30％ Acr-Bis 2.8 ml；10％ SDS 80 ul；10％AP 56 ul；TEMED 6 ul。 ④ 向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20 min后胶即可聚合； ⑤ 按如下体积配制6％浓缩胶3.0 ml，混匀：ddH2O 1.0 mol/LTris-HClpH
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