31282-04-9型潮霉素B试剂库存

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名称：31282-04-9型潮霉素B试剂库存
品牌：百奥莱博
英文名：Hygromycin B
产地：国产|进口
规格：1g
本品常用做蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水，PBS溶液。

CAS：31282-04-9
储存条件：-20℃
别名：湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价：≥950U/mg

潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种*基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法

1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项：
1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自大肠杆菌之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2)本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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31282-04-9型潮霉素B试剂库存关键词：潮霉素B干粉,湿霉素乙,潮霉素B试剂,效高素


·维生素E(生育酚)
编号：QN0114
英文名称：Vitamin E
规格：5g

别名：产妊酚;维他命E;生育酚

CAS号：59-02-9
分子式：C29H50O2
分子量：430.71
储存条件：-20℃

·DMSO(细胞培养级)
编号：QN0748
英文名称：DMSO(Dimethyl sulfoxide)
规格：50ml|100ml|250ml
DMSO属于非质子极性溶剂，常用于化学反应、pcr反应以及在细胞、组织和器官的保存中用作玻璃化低温冷冻防护剂。DMSO用于细胞冷冻培养基内，可以保护细胞免受冰晶引起的机械性损伤。它也可以用于主培养、亚培养、重组异倍体、杂交瘤等系列细胞株，胚胎干细胞(ESC)和造血干细胞的冷冻保藏。另外常常与BSA或FBS混合使用。

别名：二甲亚砜;二甲基亚砜
CAS号：67-68-5
分子式：C2H6SO
分子量：78.13
纯度：＞99.9
性状：无色透明液体
储存条件：室温

二甲基亚砜具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、*和*仿等大多数有机物，被誉为“万能溶剂”。

互溶性：
• 完全互溶：LDPE, HDPE，聚丙*(代"烯"), PPCO,聚甲基戊烯，尼龙，teflon FEP
• 中度互溶：聚*乙*(代"烯")，ECTFE/ETFE
• 不 互 溶：聚砜,，flexible and rigid PVC tubing，聚碳酸脂

DMSO的用途非常广泛：
(1)DMSO广泛应用在人、动物细胞株及细菌噬菌体λ的低温防护中，制备DMSO溶液用来冷冻细胞的步骤如下：
1)配制冷冻培养基：含有细胞培养用培养基、10-20% 血清和5-10% DMSO;
2)用胰酶或其他合适的方法消化贴壁细胞;(细胞最好处于对数增长期)
3)低速离心(4℃，250 × g, 10min)收集细胞，吸去培养基;
4)用冷冻培养基悬浮细胞，使细胞密度为106 -107 cells/ml;
5)平均分配细胞，装入冻存管内;
6)依照标准冻存程序冷冻细胞，冻存在-70℃ 或更低的温度内;
(2)细胞融合时，40-50% PEG 溶液内加入10% DMSO;
(3)有文献报道DMSO作为缓冲液的成分，用于以下的实验：Poly(A+)RNA的纯化， E. coli感受态细胞转化、PCR反应、cDNA文库的扩增、DNA测序、DEAE-葡聚糖介导的细胞转染、聚凝胺介导的DNA转染;
(4)有相应的程序描述到用DMSO回收膜过滤后的DNA，用于接下来的PCR扩增反应;
(5)用于DNA测序的毛细管电泳技术将5% DMSO (v/w)混入2 M尿素中，如果需要可以调整DMSO浓度到100%。
(6)有研究报道不同浓度的DMSO与寡核苷酸的熔点温度关系;
(7)有研究描述利用DMSO提高杂交瘤细胞中单克隆抗体的产量;调查发现低温冷冻前用含有DMSO的培养基高温培养杂交瘤细胞。
(8)文献报道利用DMSO修饰蛋白中的磷酸丝*酸和磷酸苏*酸残基用作磷酸化状态的质谱分析(MS);
(9)文献报道水和DMSO中的亮脯利特(Leuprolide)降解作用;

注意事项：二甲基亚砜(DMSO)不能使用PS、PVC、PC材料的容器，而应该使用LDPE、HDPE、PP材料的容器。


31282-04-9型潮霉素B试剂库存关键词：潮霉素B干粉,湿霉素乙,潮霉素B试剂,效高素
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·红霉素
编号：QN0098
英文名称：Erythromycin A
规格：1g
本品在转肽步骤抑制肽链延长，与核糖体结合抑制细菌蛋白合成，对细菌诱发红霉素抗性。抗菌谱：革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。

CAS：114-07-8
分子式：C37H67NO13
分子量：733.93
储存条件：室温
性状：白色粉末

红霉素(Erythromycin，EM)是一种大环内酯类抗生素，其抗菌谱相似或者稍广于青霉素。不仅对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有较强抑制作用，还能够抑制支原体，衣原体，立克次体和少数分枝杆菌等。其作用机理是能够穿透细胞膜，与50S核糖体的23S rRNA结合，干扰*基酰移位作用(aminoacyl translocation)从而抑制多肽延伸，并最终阻断蛋白合成。红霉素还具有抗炎症和促动力特性。研究显示红霉素能抑制NF-κB的转录激活，导致细胞因子如IL-8和IL-6的表达受抑制，此作用是通过*调神经磷酸酶 (calcineruin)非依赖性的T淋巴细胞信号而实现的。适用于细胞培养，推荐工作浓度约为100 μg/ml。



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