pUC18批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖pUC18批发在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：pUC18批发
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：5ug(0.1 OD)
编号：XH029
浓度
250～1,000μg/ml
贮存溶液
Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
EDTA 1mM

产品说明
pUC18载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点，因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如：JM109等) 进行转化后，在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时，可以很容易地通过兰白筛选，判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因，对插入载体中的DNA片段进行测序等。进行DNA测序时，可以方便地使用M13系列的通用引物。
■ 链长
2,686 bp
■ 用途
1. DNA片段的克隆。
2. 利用lac promoter进行基因表达。
3. 使用M13系列引物进行DNA测序。

关于pUC18批发的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·BL21(DE3)pLysS受体菌
编号：XH048
规格：1ml
基因型：：F_ ompT hsdS B(rB_mB_)dcm gal (DE3)pLysS Cam r
细胞种类
高效表达宿主菌BL21(DE3)pLysS
该菌株带有质粒pLysS，具有*霉素抗性。该质粒含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。该菌适合毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
保存：所有受体菌均为甘油保存，-70℃可长期保存，-20℃可保存一年。

·亲和硅烷bind-silane
编号：XH003
规格：100ml
亲和硅烷又叫亲水硅烷，用于电泳时让胶粘附在玻璃板上。此产品为即用型产品，一般不用稀释。
使用方法：
玻璃板必须彻底洗净。先用温水和洗涤剂洗净，用水洗掉洗涤剂,再用去离子水冲洗干净。最后用乙醇洗板。
1） 长玻璃板的处理
每次铺胶前均需用亲和硅烷对长玻璃板进行处理。
1、 用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许（1ml左右），涂在长玻璃板上。要将整块板都涂满、涂匀。
2、 4~5分钟后，用95%乙醇洗长玻璃板三次，以去除多余的亲和硅烷。冬天可能要放的时间更久一些，或者用电吹风吹一下。
2） 短玻璃板的处理
每次铺胶前均需用剥离硅烷对短玻璃板进行硅化处理。
1、 处理短玻璃板前先更换手套，以防与亲和硅烷交叉污染。
2、 用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量（1.5ml左右），涂在短玻璃板上。要将整块板都涂满、涂匀。
3、 5~10分钟后，用干净镜头纸擦去多余的剥离硅烷。
注意事项：
1、本品不可用于硅化玻璃容器。
2、天气气温低时，剥离硅烷有时会析出，涂板时会造成粘胶现象，因此当室内温度低于20度时，要首先将剥离硅烷预热到30-40度，玻璃用吹风机吹热才开始涂板。
因为跑一次电泳比较费时费力，而亲和硅烷和玻璃硅烷使用条带与温度和个人的使用手法有关，因而在初次使用时，可以先涂完制胶后，直接分离测试一下，看结果是否理想。以免浪费时间和样本。特别是亲和硅烷，在没有完全凉干时就制胶，很溶液造成胶贴到另一边，分开时将胶弄破。



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·辣根过氧化物酶（HRP）标记套装
编号：XH087
规格：一套
保存条件：HRP（辣根过氧化物酶）-20度保存，透析袋2－8度处理。其他常温保存。
产品说明：本套装是将HRP标记的常用试剂集合为一体而成。本操作流程为经碘的高碘酸氧化法。适合于蛋白等含有*基物质的标记。特别是抗体的标记。
如果待标记物分子量太小（如小于15KD），可能会穿过透析袋而造成样品损失。
标记原理：在低PH下使RP经NaIO４氧化后形成的醛基可蛋白等分子的*基相连，形成斯夫氏硷，后者可进一步用NaBH４还原生成稳定的酶标记物。
操作方法：
一， 标记量的计算：HRP（辣根过氧化物酶）分子量为40KD左右。一般为HRP：待标记物＝2：1到4：1之间。比如抗体IgG分子量一般为150－160KD。则10mg HRP可标记抗体在10mg-20mg之间。
二， 计算好各步反应时间。作好开始标记的准备工作，最好是从下午开始。将HRP（辣根过氧化物酶）一共10mg加入1ml双蒸水溶解。溶解后可放－20度存放一个月。如果想作两次标记，可适当称量5mg。但并不推荐称量更小的质量。以免产生更大误差。而且透析袋一般也只够两次用量。
三， 剪切合适长度透析袋，用双蒸水清洗三次备用。透析袋分宽窄两种，适合于不同量样品的透析，请自己安排。称取21.3mg NaIO４，加入0.5ml双蒸水溶解(现配现用，浓度为0.2M)，将100mM乙酸*（PH4.4）用双蒸水稀释100倍成1mM乙酸*（PH4.4）。准备待标记物，如果待标记物本身盐含量很低并且缓冲力差，如生理盐水，可等二天再准备。如果不确定，将0.2M PH9.5 CB稀释20倍（请不要一次稀释完，留1－2ml左右备用），作为透析液，将待标记物装入透析袋中4℃透析过夜，透析袋适当留长约2ml体积的量以备第二天加入酶（透析袋使用请见附录）。
四， 以一次标记完为例，如果标记量小，可按比例减小试剂的用量。取0.2ml现配的NaIO４溶液加入HRP溶液中，混匀，避光常温反应两小时。装入透析袋中，在稀释过的乙酸*（PH4.4）溶液中4℃透析过夜（透析袋使用请见附录）。
五， 第二天早上，如果样品为固体，可用水溶解，加入1/20体积的0.2M PH9.5 CB，混匀。取出活化好的HRP装入一适合离心管中，加入50ul 0.2M PH9.5 CB，混匀，立刻加入待标记物中，混匀。避光常温反应两小时。
六， 加0.1ml新配的10mg／ml NaBH４液，混匀，常温半小时。
七， 配制合适的透析液，如生理盐水或者PBS等。透析酶标记物。
八， 如果有条件进一步纯化，可透析半天后去进一步纯化，如果不纯化，请在4℃透析至少24小时。勤换液。

附透析袋使用方法：
本透析袋已预处理过，用双蒸水清洗后将水用适当吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用铁夹，但如果铁夹不够用，下部可用细线或者其他的透析袋夹。
将透析袋轻轻的折上两到三折。用线或者透析袋夹封住，上面支开，加入待透析物，留一定量的空气在顶上，并小心的折一折，用铁夹夹住，轻轻的挤压，如没发现有液体流出，可放入透析液中。一般透析可用纯净水瓶去顶使用。用一次性筷子或者其他合适物穿过铁夹，将透析袋吊在透析液中，补充透析液，使透析液盖过透析袋中的液面而不要淹过铁夹下面。


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·SABC(山羊IgG)-POD免疫组化试剂盒
编号：XH114
规格：100T
试剂盒组成:
1， 封闭液（5%BSA）：10ml。
2， 3% H2O2：10ml。
3， Bio-兔抗山羊IgG：浓缩液100ul。
4， SABC-POD:浓缩液100ul。
5， 稀释液：30ml。
6， 显色液（1ml+1ml）:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B。
试剂盒保存：如果一段时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，封闭液和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用
试剂盒简介：
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG的免疫组化实验. DAB显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂：
1．粘片剂多聚赖*酸。
2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）
3． 0.01M柠檬酸*缓冲液
4、苏木素
实验步骤: 微量试剂请离心后使用
以石蜡切片为例
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2. 3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚：a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 柠檬酸*缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.4）洗涤1-2次。b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟， PBS（pH7.2-7.6）洗涤2-3次。c、跳过此步，直接进入下一步。
4． 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
5．用稀释液将一抗（如山羊抗IL-10）按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据使用量，用稀释液将Bio-兔抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-羊抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
7．根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
8．DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞片，常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。

对于冰冻切片，固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。


因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

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