手机验证
2~8℃
一年
983
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括植物线粒体DNA提取试剂盒优惠促销在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:植物线粒体DNA提取试剂盒优惠促销
产地:国产|进口
规格:50T/100T
编号:XH002
品牌:百奥莱博
储存条件:2~8℃,有效期一年。DNASE I -20℃保存。使用前,在DNase I中加入600ul(50T)或者1200ul(100T)的DNA酶反应液,分装后-20℃保存三个月,如果超过三个月,活性可能会降低,请自行订购DNASE I。线粒体裂解液使用前常温保存,如有沉淀可37℃水浴溶解,不影响使用。
三,说明
线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心得到比较纯净的线粒体,再利用DNA酶消化和裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA,最后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。
本试剂盒用于从植物叶片中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体DNA的提取制备。
四,操作步骤
准备工作:在DNASE I中加入600ul(50T)或者1100ul(100T)的DNA酶反应液,适当分装后-20℃保存。线粒体裂解液保存于常温,如有沉淀37℃水浴溶解,离心机温度下降到4℃(2-8℃),如无低温离心机,也可以常温离心,并将离心时间为10min的改为5min,但最后所得DNA品质及产量可能会有一定影响。
1. 样本采集前处理:无论田间自然生长还是实验室组织培养,采摘前须避光生长24-48小时,以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量植物细胞裂解液,加入0.5% β-巯基乙醇,10ml 植物细胞裂解液加入50ulβ-巯基乙醇,混匀,形成植物细胞裂解液/β-巯基乙醇溶液,此溶液可2-8度保存一个月。
2. 叶片用蒸馏水清洗2-3次,滤纸吸干,有条件请用液氮研磨叶片1-2克,研磨完后,取800mg左右研磨的叶片粉,加入1.5ml预冷的植物细胞裂解液/β-巯基乙醇溶液,混匀。如果无条件(无液氮),请预冷研钵,取洗过的叶片1000 mg,用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的植物细胞裂解液/β-巯基乙醇溶液,冰上研磨至看不见明显组织块;
3. 将研磨物放置合适的离心管,4℃,1000× g 离心5 min;
4. 将上清转移到一新的离心管中,在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀,再次4℃,1000× g 离心5 min,取上清;合并两次上清,将上清4℃ 1000× g 再次离心5 min。
5.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 16,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min;
7.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 16,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
8. 加入100ul DNA酶反应液重悬线粒体,吹打均匀后,再加入10ul DNASE I溶液(见准备工作),混匀,37℃水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃, 12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清,再加入200ul TE 重悬线粒体沉淀,4℃, 12,000 × g 离心5 min,洗去残留的DNA酶。
9.得到的沉淀,用200ul TE缓冲液重悬线粒体沉淀,加入10ul RNase A。加入200ul线粒体裂解液,轻轻混匀(不可吹打),放置1-2min,再加入150ul蛋白沉淀液,迅速混匀。4℃, 12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。
10.取上清,加入一新的离心管中(如用于酶切分析,可加入此步:选用等体积的酚*仿异戊醇25:24:1抽提一次,再用*仿抽提一次,或者直接用*仿抽提两次,一般来说,此步可去掉一些微量蛋白及糖类,但会造成线粒体DNA的损失,因而用于PCR时可省,并不影响后续实验),加入0.6倍体积的异丙醇(如无异丙醇,可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA,如离心管太满可分两管)及5-10ul 核酸核酸助沉剂,混匀,-20℃沉淀半小时左右(此步可省),4℃, 12,000 × g 离心10 min。
11. 弃上清,再加入1ml 70%乙醇清洗,4℃, 12,000 × g 离心5min。重复用70%乙醇洗一次。
12. 弃上清,再次离心1min 吸弃上清,不要碰到管底,开盖凉干约5-105min。
13.加入20-30ul TE缓冲液,轻弹管底,37℃水浴5分钟,线粒体DNA溶解。
14. 进行DNA电泳检测及-20℃保存,进行下步的实验。
四 注意事项:
1. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
2. 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
3. β-巯基乙醇有毒,请注意通风及防护
一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
[rpm] 2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
关于植物线粒体DNA提取试剂盒优惠促销的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·Bradford蛋白浓度测定试剂盒
编号:XH067
规格:2500微孔
本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔,如果是1ml比色皿时可做500孔。
产品简介:
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明:
一,微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品,取10ml,加240ulPBS稀释至250ml ,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml 5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二,分光光度计法
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下:
1,取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。
2,取100ulBSA,加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。
3,5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml 5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4,按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来润洗比色皿)
5,反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。
植物线粒体DNA提取试剂盒优惠促销关键词:XH002,百奥莱博,植物线粒体DNA提取试剂盒
·HRP-羊抗小鼠IgG
编号:XH091
规格:100ul/1ml
辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体,是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学的各个分支学科中的特异、敏感和安全的免疫化学制剂。我们生产的辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗小鼠IgG是将辣根过氧化物酶(HRP,来源于SIGMA),经过碘酸*氧化而标记在抗体羊抗小鼠IgG(来源于我公司自己纯化的抗体)分子上,而制成HRP-羊抗小鼠IgG。
储存条件:-20℃冻存。
浓度:抗体2mg/ml。HRP 1mg/ml
应用范围:HRP-羊抗小鼠IgG主要用于一抗来源于小鼠多抗(单抗也行)的后续实验。如免疫组化,Western blotting,ELISA等实验。
主要性能:
免疫组化:1:20~50,DAB显色
免疫印迹法:1:100~400,DAB显色,1:1000~5000,ECL发光显色
ELISA法:1:500~2000(最高可达一万),用TMB显色
·线粒体提取试剂盒
编号:XH058
规格:50T/100T
二,说明
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
三,操作步骤
1. 样本处理
a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次;
b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次;
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000× g 离心5 min;
3. 取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000× g 再次离心5 min。
4.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;
5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min;
6.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
6. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事项:
1. 为保证获得完整的线粒体,第一是全程低温操作。第二是快速。第三,在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。
五 储存:四周内使用可4℃储存,长期置-20℃
转速与离心力换算
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
[rpm] 2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
植物线粒体DNA提取试剂盒优惠促销关键词:XH002,百奥莱博,植物线粒体DNA提取试剂盒
NF-251 冻干羊抗人Tf血清
四丁基*化铵三水合物 Fast red GG salt 429-41-4
ARB12395 大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)Elisa定量检测 Rat monocyte chemotactic protein 4,mcp-4 ELISA KIT
ARB11138 人肿瘤坏死因子α(TNF-α)elisa检测 Human tumor necrosis factor α,tnf-α ELISA KIT
ARB13390 牛瘦素(LEP)含量检测
ARB13730 兔核因子κB受体活化因子配基(RANKL)Elisa方法检测 Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa b ligand,rankl ELISA KIT
甲基绿 1,8-ANS 7114-03-6
BL0930 RBITC标记羊抗鸡IgG抗体
SJ0540 葡聚糖凝胶C-25
PY02-176 麦迪、麦白霉素检定培养基 250克
BTN130640 核酸内切酶V Endonuclease V
92-71-7 PPO 2,5-二*基恶唑
SJ0850 兔血清
ARB11124 人肺炎衣原体抗体IgA(CPn-IgA)elisa测定使用说明书 Human chlamydia pneumoniae iga,cpn iga ELISA KIT
BTN120404 碱性磷酸酶,牛小肠 Alkaline Phosphatase,Calf Intestinal
PY08-037 乳糖发酵管(带导管) 3ml 10支/盒,用于大肠菌群的确证试验
ARB10079 人chemerin 免费代测 Human chemerin ELISA KIT
甲基紫 Ponceau 2R 8004-87-3
3-(N-玛啡啉)-2-羟基丙磺酸*盐 Polygalacturonic acid sodiu*(代"m") salt 79803-73-9
37326-33-3 透明质酸酶 Hyaluronidase
B0601 山羊血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
C1701 大鼠血清(无菌过滤)
我公司正在优惠促销DNA纯化等系列产品,期待您的咨询选购植物线粒体DNA提取试剂盒优惠促销。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。