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- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 库存:
815
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)多少钱在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)多少钱
品牌:百奥莱博
规格:1ml/10ml
编号:XH034
产地:国产|进口
产品简介:
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂,适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现,稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差,而且增加了PCR反应的特异性,降低了对PCR条件的要求,使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系,含染料是指含有电泳指示剂(并不含核酸染料),PCR结束后可以直接电泳,但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测:
经检测无外源核酸酶活性,PCR方法检测无宿主DNA残留,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,所有产品在-20℃条件下可保存一年以上,4℃放置三个月或室温放置一周,依旧有很好的活性。
关于北京2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)多少钱的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·细胞核提取试剂盒
编号:XH064
规格:50T/100T
二,说明
细胞核提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的细胞核的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,性能稳定。
三,操作步骤
1. 样本处理
a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织,可用双层纱布过滤。
b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,再加入50ul Reagent A,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨细胞20~30次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中,4℃,700× g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀;
3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重悬液,沿管壁小心地加入到此离心管中,置于Medium Buffer之上,4℃, 700 × g 离心5min。将上清转移到新离心管,细胞核沉淀在管底;
5. 弃上清,在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉,1000 × g 离心10min ,弃上清,得较纯的细胞核沉淀;
6. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事项:
1. 为保证获得完整的细胞核,第一是全程低温操作。第二是快速。第三,在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。
五 储存:四周内使用可4℃储存,长期置-20℃
转速与离心力换算
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
[rpm] 2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
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·5×蛋白上样缓冲液(配有β-巯基乙醇)
编号:XH056
规格:10ml
产品简介:
本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS,β-巯基乙醇,*酚蓝,缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS还可以断开分子内和分子间的*键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构,β-巯基乙醇可以断开半胱*酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。*酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
保存时间:
未混合前2-8℃可保存一年,混合后保存三个月。
使用说明:
1. 根据用量,以每1ml的5×蛋白上样缓冲液加入50ulβ-巯基乙醇,混匀。此即为配好的蛋白上样缓冲液。此配好的蛋白上样缓冲液在2-8℃保存三个月。
2. 请按每40微升蛋白样品加入10ul配好的上样缓冲液的比例来使用。如果蛋白浓度过高,可用双蒸水稀释。
3. 混匀后,100℃水浴加热3-5分钟,使蛋白变性。
4. 冷却到室温后,离心数秒后,混均再离心30秒取上清直接上样即可。
注意事项:
β-巯基乙醇味道特别难受,所有操作最好是在通风柜中操作。如果没有通风柜,也尽量找一通风处操作,或者使用5×蛋白上样缓冲液(含DTT)。
8%胶时*酚蓝大概在30kd左右, 12%胶时,约在20kd左右,15%胶时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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·羊抗猪IgG(纯化抗体)
编号:XH092
规格:1mg/10mg
先以A蛋白纯化免疫球蛋白猪IgG,用此猪IgG免疫山羊,经过多次免疫后,测得山羊血清的效价达到要求后,动脉一次取血,静置得到血清,血清采用DEAE离子交换吸掉杂蛋白,再用硫*(代"酸")铵沉淀,透析,定量等进一步处理得到纯化羊抗猪IgG抗体,此纯化抗体可以用于标记,免疫沉淀,ELISA等常规免疫学实验。
如果客户对抗体纯度要求更高,本公司可以定做免疫亲和纯化的抗体,以猪IgG结合在树脂上,吸附全部有活性的抗体,这样得到的抗体纯度更高,当然,成本也更高。
·SABC(小鼠IgG)-FITC免疫组化试剂盒
编号:XH109
规格:100T
试剂盒组成:
1, 封闭液:10ml,5%BSA
2, 生物素化羊抗小鼠:浓缩液100ul。
3, SABC-FITC:浓缩液100ul。
4, 稀释液:30ml。
5, 抗荧光衰减封片剂
试剂盒简介:
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验. FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂:
1.粘片剂多聚赖*酸
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M柠檬酸*缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2.热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3.滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4.用稀释液将一抗(如小鼠抗IL-10)按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.根据使用量,用稀释液将生物素化羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购北京2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)多少钱。
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文献和实验【资源】一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料
EvaGreen qPCR 荧光染料一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料 EvaGreen®是一种用于实时定量 PCR(qPCR)的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I。除了有相似的光谱特性,EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I。首先,EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I。因此,使用EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
操作。 3. 每管或每孔都要换新枪头!不要连续用同一个枪头加样! 4. 所有成分加完后,离心去除气泡。 5. 每个样品至少 3 个平行孔。 参比或者校正染料(reference dye,passive dye)常用的是 ROXTM (现在已经是ABI的注册商标了!)或者其他染料,只要不影响检测 PCR 产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非 PCR 震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把 ROXTM 配制在 MasterMix
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法,最好在PCR扩增程序结束
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