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- 百奥莱博
- 北京
- WE0297-YZK
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃保存，避免冷
- 保质期：
长期
- 英文名：
One Step Western Kit HRP(Mouse)
- 库存：
744
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)优惠，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)优惠，产品信息：
类别：蛋白质研究
英文名：One Step Western Kit HRP(Mouse)
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| 一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗) | WE0297 | 50次 |
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：One Step Western Kit HRP(Mouse)
规格：50次
编号：WE0297
本试剂盒是百奥莱博研发的Western Blot检测试剂盒，1小时左右能够得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时
间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次(每次5 分钟)后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为鼠来源的实验系统使用。
| 组份 | 50次 |
| Blocking Buffer |
500ml |
| Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse) | 5×1ml |
| Dilution Buffer | 500ml |
| Wash Buffer(10×) | 500ml |
注意事项：
1、客户自己准备鼠来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)抗体反应液(鼠)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2-8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(鼠)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(鼠)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力不好的抗体建议不重复回收使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2～8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2～8℃保存，避免冻融。
操作步骤：
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5cm×8cm 膜为例：
1、漂洗液准备：取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml，即为1×Wash Buffer，待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭：转膜完成后，将膜浸没到10ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。
3、漂洗：倒掉封闭液，加入8-10ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)100μl到离心管中，加入鼠源一抗3-10μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中，充分混匀。
注意：
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100μl抗体反应液HRP(鼠)到EP管中，加入10μl一抗，加入到10ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面)，在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。
应用实例：
实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A：普通WB对照：beta-actin鼠单抗(WE0354)5μg室温孵育40 min，洗膜后二抗羊抗鼠-HRP(WE0393)1：10000稀释，室温4 0min，ECL(WE0308)曝光。
B: 一步法WB： beta-actin鼠单抗(WE0354)5μg室温孵育40 min，ECL(WE0308)曝光。
实例二 抗原为E.coli多标签蛋白裂解液
C：普通WB对照：GST鼠单抗(WE0352)2.5μg室温孵育40 min，洗膜后二抗羊抗鼠-HRP(WE0393)1：10000稀释，室温40 min，ECL(WE0308)曝光。
D：一步法WB： GST鼠单抗(WE0352)2.5ug 室温孵育40min ， ECL(WE0308)曝光。
常见问题及解决方法：
| 问题 | 可能原因 | 解决方案
|
| 信号太弱或者 看不到条带 |
蛋白上样量太少 | 进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。 |
| 蛋白转膜效率太低 | 优化转膜时间或者电流，确保转膜时膜与胶之间没有气泡。 | |
| 一抗亲和力较低 | 增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号 |
|
| 一抗亲和力较低 | 对于低亲和力抗体来说，减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟，减少到每次5分钟可以增加信号。 | |
| 背景偏高 | 一抗使用过量 | 减少一抗的使用量。
|
| 一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应 |
使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。 | |
| 洗膜时间太短 | 增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。 | |
| 曝光显影时间过长 | 减少曝光时间。如果信号和背景都高，可以等待一段时间 ，等背景信号减弱后，再进行曝光。 |
|
| 容器或者试剂被污染 | 每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套，使用清洁的镊子处理膜。 |
储存条件：2～8℃保存，避免冷冻
一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)优惠专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司
关键词：一步法快速WB试剂盒,一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗),WE0297,One Step Western Kit HRP(Mouse)
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| WE0343 | 一抗 | 抗V5标签单克隆抗体 |
| WE0355 | 一抗 | 抗β-Tubulin单克隆抗体 |
| WE0390 | 二抗 | AP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
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