cDNA第一链合成试剂盒价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

cDNA第一链合成试剂盒价格由老牌试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持，本产品用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多cDNA第一链合成试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：cDNA第一链合成试剂盒价格
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：WE0132
规格：100次
  本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒中使用的BalbScript逆转录酶是M-MLV由来的新型高效逆转录酶，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA第一链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。点突变消除RNase H活性，酶的延伸性能提高，有效改善逆转录酶与RNA模板的亲和力，可获得长至12 kb的cDNA。精心优化的RT Buffer使逆转录酶应用范围更广，对后续的PCR以及定量PCR实验兼容性高。该试剂盒配备所有逆转录试剂，使用简单方便。适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR，以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

 

组份	100次
BalbScript，200 U/μl	25μl
5×RT Buffer	120μl
Primer Mix	60μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	120μl
DTT，0.1 M	60μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点
1、高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。
2、良好的延伸能力：点突变消除RNase H活性，改善逆转录酶与RNA模板的亲和力，可获得长至12 kb的cDNA。
3、灵敏度高：可利用pg级的总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、使用方便：逆转录试剂盒中已配备所有逆转录试剂，仅需准备模板即可轻松完成逆转录。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

操作步骤：
注意：1ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I．逆转录操作步骤：
1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、BalbScript和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
BalbScript，200 U /μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
5、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
6、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II．若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、BalbScript和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为13μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
RNase-Free Water	up to 13μl

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
BalbScript(200 U/μl)	1μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

6、进行cDNA第一链合成：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，50℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，50℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，加入量应小于PCR反应体系的1/10，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

cDNA第一链合成试剂盒价格极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)
编号：WE0289
英文名称：SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing，5×)
规格：5×2ml
  SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于非还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本品不含还原剂如巯基乙醇或DTT。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。进行常规电泳。

储存条件：-20℃


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·唾液DNA样本保存管
编号：WE0402
规格：20套
本产品包含唾液采样盒和唾液DNA样本保存管，可稳定保存唾液DNA样本。唾液DNA样本保存管中含有1ml的唾液DNA保存液，能迅速抑制唾液中的核酸酶，稳定唾液DNA。常温下，唾液DNA样本保存管中的DNA样本的储存和运输的时间长达两年。提取的DNA适用于下游多种基因检测，如PCR、芯片分析及二代测序等。

大部分基因的研究测试都始于DNA的采集，而传统的血液样品采集方法操作复杂，成本较高，新鲜血液需要在低温下保存，造成运输携带不方便，并且这种采血方法对被收集者造成伤害，带来痛苦，被绝大多数人所厌恶、甚至拒绝。而唾液中含有丰富的DNA，是样品采集的优质来源。唾液DNA样本采集与常规血液DNA样本采集相比，唾液样品采集是一种对人体无伤害、无痛苦的获取DNA的方法。该法不会对被收集者造成任何不适，容易被接受，因而能最大限度的扩大基因研究的取样范围，特别适合分子流行病学大人群调查。常温下唾液DNA样本可以保存多年、绿色环保、携带方便。




·FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0392
英文名称：Goat Anti-Mouse IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链。本产品检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。本

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：Immunofluorescence(1：25-100)


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·BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)
编号：WE0155
英文名称：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)(Low ROX)
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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