尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)

尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)

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  • ¥130 - 1770
  • 百奥莱博
  • 北京
  • WE0115-HLV
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20℃,避免反复冻

    • 保质期

      长期

    • 英文名

      Uracil-N-Glycosylase(UNG)

    • 库存

      453

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。


    名称:尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)
    编号:WE0115
    品牌:百奥莱博
    英文名:Uracil-N-Glycosylase(UNG)
      尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),通过大肠杆菌表达纯化的重组酶,该蛋白分子量为25kD,可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,并且对RNA无活性,主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为:在PCR反应中以dUTP代替dTTP,扩增产物片段中的T全部被U取代,形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键,降解反应体系中含U的DNA,有效消除PCR产物的残留污染,大大降低扩增产物污染导致的假阳性,从而保证扩增的特异性和准确性。

    活性定义:37℃,60分钟内催化1 nmol尿嘧啶,从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。

    质量控制:SDS-PAGE检测纯度大于95%;经检测无核酸内、外切酶活性。

    注意事项
    1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存,每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融,大包装建议分装使用。
    2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子,一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一,使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测,T-DNA仍会积累,此抗污染系统也难以起到完全的作用。
    3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施,为了防止PCR产物的污染,尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时,必须严格规范实验室的划分和操作。

    使用方法
    以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法,实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。

    1、PCR反应体系

     
    试剂 50μl反应体系 终浓度
    Taq PCR Buffer,10× 5μl
    dATP,10 mM 1μl 200μM
    dGTP,10 mM 1μl 200μM
    dCTP,10 mM 1μl 200μM
    dTTP,10 mM 0.5μl 100μM
    dUTP,10 mM 1μl 200μM
    Forward Primer,10μM 1μl 0.2μM
    Reverse Primer,10μM 1μl 0.2μM
    Template DNA Xμl  
    Taq DNA Polymerase,5 U/μl 0.5μl 2.5 U/50μl
    Uracil-N-Glycosylase,1 U/μl 0.2μl 0.2 U/50μl
    ddH2O up to 50μl  


    2、反应条件
    步骤 温度 时间 循环数
    UNG消化 37℃-50℃ 5-10 min  
    预变性 95℃ 10 min  
    变性 94℃ 30 s 30-40个循环
    退火 55-65℃ 30 s
    延伸 72℃ 1 kb/min
    终延伸 72℃ 5 min  

    注意:通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中,先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟,然后95℃ 10分钟灭活,(同时这一步也达到预变性和热启动的效果),随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃,5-10分钟的范围内变化,可以根据实验的需要进行调整。

    储存条件:-20℃,避免反复冻融。

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