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- 百奥莱博
- 北京
- WE0115-HLV
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻
- 保质期：
长期
- 英文名：
Uracil-N-Glycosylase(UNG)
- 库存：
453
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。
名称：尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)
编号：WE0115
品牌：百奥莱博
英文名：Uracil-N-Glycosylase(UNG)
尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)，通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，该蛋白分子量为25kD，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，并且对RNA无活性，主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为：在PCR反应中以dUTP代替dTTP，扩增产物片段中的T全部被U取代，形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解反应体系中含U的DNA，有效消除PCR产物的残留污染，大大降低扩增产物污染导致的假阳性，从而保证扩增的特异性和准确性。
活性定义：37℃，60分钟内催化1 nmol尿嘧啶，从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于95%；经检测无核酸内、外切酶活性。
注意事项：
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存，每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融，大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子，一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一，使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测，T-DNA仍会积累，此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施，为了防止PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时，必须严格规范实验室的划分和操作。
使用方法：
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法，实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| Taq PCR Buffer，10× | 5μl | 1× |
| dATP，10 mM | 1μl | 200μM |
| dGTP，10 mM | 1μl | 200μM |
| dCTP，10 mM | 1μl | 200μM |
| dTTP，10 mM | 0.5μl | 100μM |
| dUTP，10 mM | 1μl | 200μM |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | Xμl | |
| Taq DNA Polymerase，5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| Uracil-N-Glycosylase，1 U/μl | 0.2μl | 0.2 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
2、反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| UNG消化 | 37℃-50℃ | 5-10 min | |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中，先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟，然后95℃ 10分钟灭活，(同时这一步也达到预变性和热启动的效果)，随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃，5-10分钟的范围内变化，可以根据实验的需要进行调整。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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文献和实验N 一 g1ycosylase （尿嘧啶糖基化酶）处理可降解交叉污染的 PCR 产物，而不降解基困组 DNA 模板，然后热灭活此酶，再进行扩增反应（ Gene ， 1990 ， 93 ： 125 ）。美国 PE 公司提供此类试剂盒（ PCR carry-over preventionkit 。 3 ．在 PCR 反应前加入一种光化学试剂，反应完成后激活该试剂，光化学试剂可交联 DNA 链，使之不能再扩增（ Nucleic Acids Res ， 1991 ， 19 ： 99 ）。 二
染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为：“为了能够暴露BrdU的抗原表位，必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解，但经历了如此严重的处理后，细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。” 事实上，现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生----EdU检测。EdU (5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应
在50-55℃（若用国产恒温水浴箱建议温度设定在53℃为好）；（4）DNA模板量应控制在只要遵循以上几点基本上能保证99%未甲基化的胞嘧啶转化尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。但是，此修饰过程中模板DNA有约96%已经降解 .当DNA样品较少时（如石蜡包埋组织、血清DNA），在纯化回收时可加人适量鲑鱼精DNA或糖原（约1g）作为载体，有利于DNA沉淀（加入载体后轻轻晃动Eppendof管可见絮状DNA富集现象）。甲基化特异PCR可能出现的问题与对策1.引物因素分析MSP的引物设计的质量是扩增成败
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