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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻
- 保质期:
长期
- 英文名:
Uracil-N-Glycosylase(UNG)
- 库存:
453
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)(国产,进口)
编号:WE0115
品牌:百奥莱博
英文名:Uracil-N-Glycosylase(UNG)
尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),通过大肠杆菌表达纯化的重组酶,该蛋白分子量为25kD,可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,并且对RNA无活性,主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为:在PCR反应中以dUTP代替dTTP,扩增产物片段中的T全部被U取代,形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键,降解反应体系中含U的DNA,有效消除PCR产物的残留污染,大大降低扩增产物污染导致的假阳性,从而保证扩增的特异性和准确性。
活性定义:37℃,60分钟内催化1 nmol尿嘧啶,从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
质量控制:SDS-PAGE检测纯度大于95%;经检测无核酸内、外切酶活性。
注意事项:
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存,每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融,大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子,一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一,使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测,T-DNA仍会积累,此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施,为了防止PCR产物的污染,尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时,必须严格规范实验室的划分和操作。
使用方法:
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法,实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| Taq PCR Buffer,10× | 5μl | 1× |
| dATP,10 mM | 1μl | 200μM |
| dGTP,10 mM | 1μl | 200μM |
| dCTP,10 mM | 1μl | 200μM |
| dTTP,10 mM | 0.5μl | 100μM |
| dUTP,10 mM | 1μl | 200μM |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | Xμl | |
| Taq DNA Polymerase,5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| Uracil-N-Glycosylase,1 U/μl | 0.2μl | 0.2 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
2、反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| UNG消化 | 37℃-50℃ | 5-10 min | |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中,先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟,然后95℃ 10分钟灭活,(同时这一步也达到预变性和热启动的效果),随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃,5-10分钟的范围内变化,可以根据实验的需要进行调整。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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