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RORE GFP Reporter Plasmid
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京RORE-GFP报告基因质粒大量库存促销,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京RORE-GFP报告基因质粒大量库存促销
编号:SY0227
英文名:RORE GFP Reporter Plasmid
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:1μg
RORE-GFP报告基因是用于检测RORE(myocyte enhancer factor 1)转录活性水平为目的的报告基因。RORs(RAR-related orphan receptors)是细胞内转录因子核受体家族的一员,主要有三个形式RORα、RORβ和RORγ。
RORE-GFP报告基因主要应用于Retinoid-Related Orphan Receptor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。
pGMRORE-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个RORE结合位点,可以高效地检测RORE的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因,更便于后续的检测。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得RORE-GFP报告基因更易于转染。
质粒图谱
pGMRORE -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’
使用说明
pGMRORE-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。
注意事项
1)本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
储存条件:-20℃。
欲了解更多北京RORE-GFP报告基因质粒大量库存促销的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
·线粒体绿色荧光探针(Green FM)
编号:SY0573
英文名称:Mitochondrial Green FM
规格:50μg
Green FM是一种细胞渗透型的carbocyanine结构衍生物,包含标记线粒体的弱巯基反应性的*甲基官能团。本品是一种亮绿色荧光探针((Ex=490 nm,Em=516 nm)),其在水溶液中几乎不发荧光,只有当聚集在线粒体的脂质环境才能发荧光,背景荧光几乎可忽略。使得操作步骤极其简单,只需用探针孵育细胞,即可被动运输穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上,可不经过清洗直接观察。
与CMXRos不同的是本品定位于线粒体的能力不受线粒体膜电位影响,使其可能作为定量线粒体质量的一种工具。本品经乙*(代"醛")固定后染料不稳定,因此更适合活细胞染色。
虽然传统的线粒体荧光探针如TMR和罗丹明123,也能很容易的聚集在功能线粒体上,但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉,从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响因子的实验中,使其应用大受限制。
CAS:201860-17-5
分子式:C34H28Cl5N3O
分子量:671.88
外观:红色固体
激发波长:490 nm
发射波长:516 nm
储存条件:-20℃避光干燥
结构式
·His标签蛋白纯化预装柱
编号:SY0394
英文名称:Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
规格:5ml|1ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外,因其基质的耐压性(该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力),该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化,可在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化。
Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户用于纯化His-tag蛋白。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.3MPa, 3bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸(Column Size):0.7×2.5cm(1ml)
储存条件:4℃保存,有效期2年
注意事项
1)建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达蛋白为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清,0.22µm/0.45µm滤膜过滤后,置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。
3 样品纯化(以AKTA使用为例)
1)将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞,连接至色谱系统中,再折断下口,将预装柱连接到色谱系统中,注意旋紧。
2)3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3)至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4)利用泵或注射器上样。【注】:若样品粘度增加,即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压;上样量不要超过柱子的结合能力;大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7)建议用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
(三)填料再生
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa),填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:
1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。
填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。
北京RORE-GFP报告基因质粒大量库存促销关键词:SY0227,RORE GFP Reporter Plasmid,RORE-GFP报告基因质粒
·红色荧光标记人源高密度脂蛋白
编号:SY0444
英文名称:Human DiI-High Density Lipoprotein, (Human DiI-HDL)
规格:500μg
我司提供的Human DiI-HDL为无菌包装,可以直接稀释使用。除提供DiI-HDL,我们还提供不带标记的HDL,I125标记的HDL。
脂蛋白在人体中主要起到运输脂质(如胆固醇、脂质、甘油三酯)的作用,按照分子量大小,主要分为以下几种(从高到低):乳糜(CM)、极低密度脂蛋白 (VLDL)、中间密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等。其中HDL是密度最高的脂蛋白,不像其他大分子脂蛋白,主要将脂质运输到细胞,HDL是将脂质运出细胞,因此,高密度脂蛋白具有清除血管内多余血脂、清除血垢、清洁血管、维持细胞内胆固醇量的相对衡定的作用,从而限制动脉粥样硬化的发生发展,起到抗动脉粥样硬化作用。
本品Human DiI-High Density Lipoprotein为荧光探针DiI(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indo*(代"c")arbocyanine perchlorate)标记的高密度脂蛋白,可以用来观察培养细胞的HDL结合位点,或筛选HDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平,或检测组织内的受体水平。
制备方法
纯化的人健康血浆来源的HDL直接标记上DiI荧光探针,然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物,并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-HDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。
浓度:0.8-3.0 mg/ml
外观:乳状液体
吸光度比例(Absorbance Ratio):DiI/Protein=555nm/275nm=1.4
缓冲液组分(Buffer Components):0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4
储存条件:4℃,无菌避光,有效期6周
北京RORE-GFP报告基因质粒大量库存促销关键词:SY0227,RORE GFP Reporter Plasmid,RORE-GFP报告基因质粒
BL0908 FITC标记兔抗狗IgG抗体
磺胺二甲基嘧啶 Iron(II) D-gluconate dihydrate 57-68-1
ARB11634 人淋巴细胞因子尿液中含量检测 Human lymphocyte factor ELISA KIT
ARB11880 人激肽释放酶11(KLK 11)定量分析 Human kallikrein 11,klk 11 ELISA KIT
虫胶 Sarcosine Oxidase 9000-59-3
ARB11338 human胎盘蛋白13(PP13)含量测试 Human placenta protein13,pp13 ELISA KIT
ARB12477 大鼠前列腺素F(PGF)elisa检测说明书 Rat prostaglandin f,pg-f ELISA KIT
PY02-441 D/E中和琼脂基础 250克
ARB13128 小鼠促黄体激素(LH)酶联免疫定量检测 Mouse luteotropic hormone,lh ELISA KIT
58-86-6 D-Xylose D-木糖
BL1267 10×丽春红染色液
ARB13204 小鼠脑肠肽(BGP/GehrelIn)代做ELISA实验 Mouse brain-gut Peptides,bgp/gehrelin ELISA KIT
ARB11014 人补体调节蛋白(CCP)检测服务 Human complement control protein,ccp ELISA KIT
NF-268 AFP阳性对照
NF-214 羊抗人C9血清
我公司正在火爆促销报告基因检测系列产品,欢迎您的垂询选购北京RORE-GFP报告基因质粒大量库存促销。
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